http://hdl.handle.net/10366/4612 2026-04-21T06:07:50Z 2026-04-21T06:07:50Z Pinar Sala, Mario http://hdl.handle.net/10366/76539 2025-06-05T12:40:28Z 2010-01-01T00:00:00Z

[ES] En esta tesis se identifican nuevas proteínas efectoras o reguladoras de las vías de señalización de las GTPasas de la familia Rho. Para ello se plantea el estudio de la ORF SPBC4F6.12, que codifica una proteína homóloga a Pxl1 de S. cerevisiae y a la paxilina de células animales, se determina la posible relación de SpPxl1 con las GTPasas de la familia Rho, Rho1 y Cdc42 y se estudian las funciones de Pxl1 en S. pombe.; [EN] In this thesis we identify new effector or regulatory proteins of the signaling pathways of Rho family GTPases. It does so by studying the SPBC4F6.12 ORF, which encodes a protein homologous to S. Pxl1 paxilina cerevisiae and animal cells, determine the possible relationship SpPxl1 with Rho family GTPases, Rho1 and Cdc42 and functions are studied in S. Pxl1 pombe.

2010-01-01T00:00:00Z Reyes Valerón, María Abigail http://hdl.handle.net/10366/22505 2025-06-05T12:40:28Z 2009-01-19T00:00:00Z 2009-01-19T00:00:00Z López Franco, Esperanza http://hdl.handle.net/10366/22504 2025-06-10T08:03:14Z 2009-01-01T00:00:00Z

Las modificaciones epigenéticas tales como acetilación, fosforilación, ubiquitinación y ADP-ribosilación de las histonas influyen en la genética potencial del DNA. El nivel de acetilación de las histonas está controlado por las acetilatransferasas de histonas (HAT) y las Desacetilasas de histonas (HDAC). El patógeno humano Candida albicans puede crecer en al menos cuatro diferentes morfologías: levaduras, pseudohifas, hifas y clamidosporas. Las pseudohifas y las hifas son formas elongadas y se engloban bajo la denominación de formas filamentosas. El cambio entre todas las morfologías es resultado de compleja interacción entre factores internos y externos y está coordinado in parte por proteínas que regulan polaridad y que están conservadas en las células eucariotas. En C. albicans existen múltiples rutas de regulación que controlan la transición levadura-hifa. Estas rutas controlan la transcripción de un set de genes específicos de hifa, la mayoría de ellos codifican conocidos factores de virulencia. Efg1p es el mayor regulador morfogenético de C. albicans. Sin3p, un componente del complejo multiproteico de Desacetilasas de histonas Sin3p-Rpd3p en Saccharomyces cerevisiae, se une al promotor del gen EFG1. Con todos los datos obtenidos se propuso un modelo que explica la relación entre Efg1p-Sin3p y las HDAC en la morfogénesis de C. albicans. En esta levadura existen al menos cinco HDACs. El objetivo de este trabajo fue entender el papel de dos de ellas, Hos3p y Rpd3p en la regulación de la morfogénesis de la levadura patógena C. albicans.En este trabajo, se interrumpieron tres genes que codifican las proteínas Hos3p y Rpd3p (dos de ellos) en C. albicans y se analizó el papel de los mismos en la morfogénesis, en especial en la transición levadura-hifa.Las células carentes del gen HOS3 mostraron una morfología similar a la del silvestre tanto en medio sólido como en medio líquido, incluso durante la transición dimórfica. También fueron capaces de formar clamidosporas. Se analizó el perfil global de transcripción y se obtuvieron 233 genes cuya expresión se veía afectada por la interrupción del gen HOS3 tras la comparación del mutante ?hos3 y la cepa silvestre. Estos genes pertenecían a diferentes categorías funcionales, principalmente metabolismo, transporte celular y comunicación celular y transducción de la señal.C. albicans tiene dos genes homólogos al gen que codifica la HDAC Rpd3p en S. cerevisiae. Ambos genes fueron interrumpidos y el doble mutante presentaba alteraciones en la transición levadura-hifa y la formación de clamidosporas. Los mutantes sencillos presentaron fenotipo similar a la cepa silvestre. El doble mutante además presentó alterada la expresión de los genes implicados en el cambio dimórfico EFG1, CPH1, YWP1 y HWP.; Epigenetic modifications, such as acetylation, phosphorylation, methylation, ubiquitination, and ADP ribosylation, of the highly conserved core histones, H2A, H2B, H3, and H4, influence the genetic potential of DNA. The enormous regulatory potential of histone modification is illustrated in the vast array of epigenetic markers found throughout the genome. The histone acetylation level is balanced by histone acetyltrasferases (HAT) and histone deacetylases (HDAC). The human fungal pathogen, Candida albicans can grow in at least four different morphologies: yeast, pseudohyphae, hyphae and chlamydospore. Pseudohyphae and hyphae are both elongated and sometimes there has been little attempt to distinguish between them, as both are "filamentous forms" of the fungus. The switch between these forms is the result of a complex interplay of external and internal factors and is coordinated in part by polarity-regulating proteins that are conserved among eukaryotic cells. C. albicans uses a network of multiple signaling pathways to control the yeast-->hypha transition. These pathways control the transcription of a common set of hypha-specific genes, many of which encode known virulence factors. Efg1p is the mayor regulator of morphogenesis in C. albicans. Sin3p, a component of a specific histone deacetylase complex Sin3p-Rpd3p in S. cerevisiae, was shown to bind to the EFG1 promoter. A proposed model explains the relationship between Efg1p-Sin3p and HDAC in morphogenesis. C. albicans has at least five HDACs. The focus of our work was on understanding the role of two of them, Hos3p and Rpd3p in the regulation of the morphogenesis in the pathogen yeast C. albicans.In this work, we have disrupted three genes which codified to Hos3p and Rpd3p (two of them) in C. albicans and have analyzed their role in morphogenesis and especially in the yeast-hypha transition.Cells lacking of HOS3 gene could grow normally on solid or in liquid media, even during the yeast-hypha transition. ?hos3 cells were able to form normal chlamydospores. We have analyzed global transcription profile and we obtained 233 differentially expressed genes after comparison of the hos3 mutant with the C. albicans wild type strain. These genes belong to several functional categories mainly those involved in metabolism, cellular transport and cellular communication/signal transduction. C. albicans has two genes homologous to ScRpd3p. We have disrupted both genes and the double mutant showed an altered behaviour during the dimorphic switch and chlamydospores formation. Single mutants presented wild type phenotype. The double mutant has also altered the expression of EFG1, CPH1, YWP1 and HWP1, genes implicated in morphogenesis.

2009-01-01T00:00:00Z Conde Pérez, Francisco Manuel http://hdl.handle.net/10366/22497 2025-06-05T12:40:28Z 2009-01-01T00:00:00Z 2009-01-01T00:00:00Z Medina Redondo, María de http://hdl.handle.net/10366/22503 2025-06-05T12:40:28Z 2008-01-01T00:00:00Z

La formación de la pared celular de Schizosaccharomyces pombe requiere la actividad coordinada de enzimas involucradas en la biosíntesis y modificación de sus componentes, entre los que destacan por su abundancia los glucanos. El complejo enzimático ?-glucán-sintasa sintetiza ?-1,3-glucanos lineales, que permanecen desorganizados y solubles en álcali hasta que se establecen enlaces covalentes entre los ?-1,3-glucanos y otros componentes de la pared celular. Las transferasas de la pared celular cuyos sustratos son los ?-1,3-glucanos podrían estar desempeñando importantes funciones en el ensamblaje y reordenamiento de la pared celular. Diversas proteínas pertenecientes a la familia 72 de las glicosil-hidrolasas (GH72) con actividad ?-1,3-glucanosil-transferasa han sido caracterizadas en otros organismos (Gas1p, Gas2p y Gas4p de Saccharomyces cerevisiae, o Gel1p de Aspergillus fumigatus). La secuenciación del genoma de S. pombe ha permitido identificar cuatro genes (gas1+, gas2+, gas4+ y gas5+) que codifican cuatro hipotéticas proteínas pertenecientes a la familia GH72.Desde el punto de vista funcional, gas1p es esencial para la viabilidad celular durante el crecimiento vegetativo, ya que los mutantes carentes de este gen sólo son capaces de crecer en medios estabilizados osmóticamente. Por su parte, gas4p desempeña un papel básico en la construcción de la pared celular de las esporas. Finalmente, las proteínas gas2p y gas5p deben ejercer un papel minoritario en la síntesis de la pared celular vegetativa, ya que mutantes carentes de estos genes (o el doble mutante) no presentan defectos morfológicos significativos.Bioquímicamente, todas ellas poseen actividad ?-1,3-glucanosil-transferasa, aunque se diferencian por la especificidad de longitud de sustrato, el punto de corte y los productos generados. Todo ello, junto con las diferencias de expresión a lo largo del ciclo biológico, sugiere que las distintas proteínas de la familia GH72 presentes en S. pombe podrían estar realizando funciones complementarias, no solapantes, en la levadura de fisión.; The formation of the Schizosaccharomyces pombe cell wall requires the co-ordinated activity of enzymes involved in the biosynthesis and modification of its components, such as glucans. The ?-glucan-synthase complex synthesizes linear ?-1,3-glucans, which remain unorganized and alkali-soluble until covalent linkages are set up between ?-1,3-glucans and other cell wall components. Cell wall transferases using ?-1,3-glucans as substrates could perform important functions in the assembly and organization of the cell wall. Several proteins belonging to the glycoside hydrolase family 72 (GH72) with ?-1,3-glucanosyltransferase activity have been described in other organisms, such as the Saccharomyces cerevisiae Gas1p or the Aspergillus fumigatus Gel1p. At least four genes encoding putative ?-1,3-glucanosyl-transferases gas1+, gas2+, gas4+ y gas5+- have been identified in the S. pombe sequencing project. In this work, we report the characterization of gas1p, gas2p, gas4p and gas5p during the different stages of the life cycle and their catalytic activity.From the point of view of their functionality, gas1p is essential for cellular viability during vegetative growth, as gas1? null mutants are only able to grow in media supplemented with an osmotic stabilizer. gas4p plays an essential role during the construction of the ascospore wall, being necessary for spore germination. Finally, gas2p and gas5p seem to play a minoritary role in the synthesis of the cell wall, as gas2? and gas5? null mutants or gas2? gas5? double mutant do not show significant morphologic defects.From the biochemical point of view, all of them display ?-1,3-glucanosyl-transferase activity, although they differ in their specificity for the substrate length, the split point and the range of the generated products. Taking all the data into account, together with the differences in their expression profiles during the life cycle, it suggests that the GH72 proteins present in S. pombe may accomplish complementary, non-overlapping, functions in the fission yeast.

2008-01-01T00:00:00Z