http://hdl.handle.net/10366/143121 2026-04-26T02:19:54Z http://hdl.handle.net/10366/170440 [ES] sta tesis examina los roles no redundantes de SOS1 y SOS2 en diversos contextos fisiológicos y patológicos. En particular, analiza sus funciones en la biología del tejido adiposo, en el carcinoma hepatocelular (HCC) inducido por dietilnitrosamina (DEN) e inyección hidrodinámica por vena caudal (HTVI), en la respuesta a la inhibición farmacológica de SOS1 (BI-3406) y en la regeneración del epitelio intestinal. Al integrar estos distintos modelos, el trabajo resalta cómo SOS1 y SOS2 moldean de manera diferente el metabolismo, la homeostasis tisular y la progresión de la enfermedad. A nivel del tejido adiposo, SOS1 y SOS2 son esenciales para mantener la integridad del tejido y el equilibrio energético. La pérdida conjunta provoca lipoatrofia grave, colapso metabólico y muerte. SOS1 es fundamental para estadios tardíos de la diferenciación de los adipocitos, la acumulación de lípidos, la señalización de la insulina y el equilibrio redox, mientras que SOS2 cumple un papel modulador o compensatorio. Juntas, aseguran la regulación de la temperatura, el uso de glucosa y la estabilidad metabólica del cuerpo. Dentro del ámbito hepático, SOS1 actúa como un impulsor clave de la iniciación y progresión del HCC al promover el crecimiento tumoral, la reprogramación metabólica y la señalización proliferativa. Su eliminación genética reduce significativamente la carga tumoral y mejora la supervivencia, mientras que el bloqueo farmacológico con BI-3406 suprime el crecimiento tumoral y la actividad de ERK, mostrando además efectos aditivos con sorafenib, lo que lo convierte en un objetivo terapéutico prometedor. En contraste, SOS2 limita las actividades oncogénicas impulsadas por SOS1. La pérdida de SOS2 aumenta el metabolismo lipídico, la inflamación y la señalización proliferativa, agravando así la progresión tumoral. Por lo tanto, SOS1 sostiene principalmente los programas oncogénicos y metabólicos, mientras que SOS2 actúa como un freno regulador. Respecto al intestino delgado, ambas proteínas son necesarias para la proliferación epitelial, el mantenimiento de las células madre y la integridad de la barrera intestinal. Su ausencia conjunta deteriora la función de las criptas, aumenta la permeabilidad intestinal y conduce a una inflamación sistémica que deriva en sepsis. Intervenciones metabólicas o antioxidantes no ayudan, pero estrategias regenerativas con organoides o factores de crecimiento logran restaurar la barrera y mejorar la supervivencia. En conjunto, SOS1 y SOS2 son clave para mantener el tejido adiposo y la integridad intestinal, lo que permite mantener el equilibrio metabólico del organismo. En HCC, SOS1 impulsa la tumorogénesis, la proliferación hepática y la adaptación metabólica, mientras que SOS2 regula el metabolismo de los lípidos, la inflamación y las respuestas al estrés. Juntas, garantizan la homeostasis sistémica, y su disfunción provoca alteraciones metabólicas, tumorales e intestinales graves.; [EN] This thesis investigates the non-redundant roles of SOS1 and SOS2 across various physiological and pathological contexts. Specifically, it examines their functions in adipose tissue biology, hepatocellular carcinoma (HCC) driven by diethylnitrosamine (DEN) and hydrodynamic tail vein injection (HTVI), responses to pharmacological SOS1 inhibition (BI-3406), and intestinal epithelial regeneration. By integrating these diverse models, the work highlights how SOS1 and SOS2 differentially shape metabolism, tissue homeostasis, and disease progression. In adipose tissue, SOS1 and SOS2 are indispensable for maintaining tissue integrity and systemic energy balance. Combined loss results in severe lipoatrophy, metabolic collapse, and lethality. Mechanistically, SOS1 is required for late adipocyte differentiation, lipid accumulation, insulin signaling, and redox balance, whereas SOS2 provides modulatory or compensatory input. Together, they regulate thermoregulation, glucose utilization, and whole-body metabolic homeostasis. Within the hepatic context, SOS1 acts as a key driver of HCC initiation and progression by promoting tumor growth, metabolic rewiring, and proliferative signaling. Its genetic deletion significantly reduces tumor burden and improves survival, while pharmacological inhibition with BI-3406 suppresses tumor growth and ERK activity and shows additive effects with sorafenib, making it a promising therapeutic target. SOS2, by contrast, restrains SOS1-driven oncogenic outputs. Its loss enhances lipid metabolism, inflammation, and proliferative signaling, thereby aggravating tumor progression. Thus, SOS1 primarily sustains oncogenic and metabolic programs, while SOS2 functions as a regulatory brake. Regarding the small intestine, both SOS1 and SOS2 are required for epithelial proliferation, stem cell maintenance, and barrier integrity. Their combined loss compromises the crypt function, increases permeability, and triggers systemic inflammation, leading to sepsis. Neither metabolic nor antioxidant interventions were effective, whereas regenerative strategies (orthotopic organoid delivery or growth-factor supplementation) partially restored barrier function and improved survival. Overall, SOS1 and SOS2 are indispensable for preserving adipose tissue and intestinal integrity, ensuring proper metabolic balance and systemic stability. In the context of HCC, these regulatory functions extend to liver physiology, where SOS1 primarily drives tumorigenesis, hepatocyte proliferation, and metabolic adaptation, while SOS2 modulates lipid metabolism, inflammatory signaling, and stress responses. Together, they safeguard systemic homeostasis, and their dysfunction results in severe metabolic, oncogenic, and intestinal disorders 2025-01-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/170439 [ES] La patología del mastocito incluye un grupo heterogéneo de síndromes y enfermedades con un comportamiento clínico y una evolución variables1, de los que merece destacar el MCAS y la mastocitosis. En las últimas décadas, los marcadores genéticos y, en especial, la demostración de la naturaleza clonal de los mastocitos, han adquirido una relevancia creciente en ambos grupos de enfermedades. Esto es debido a la presencia de mutaciones del gen KIT, y en particular de la mutación de KIT p.D816V, en más del 90%2 de pacientes adultos con mastocitosis, dos terceras partes de las mastocitosis pediátricas3–5 y en alrededor de un 5-10% de los MCAS6. A pesar de que para el diagnóstico de SM habitualmente se requiere del estudio de la MO, desde hace varios años se ha descrito la presencia de la mutación de KIT p.D816V también en SP, sobre todo en aquellos pacientes que presentan una elevada carga mutacional y/o grado de infiltración por mastocitos clonales7,8. Por esta razón, en la clasificación de la mastocitosis de la OMS de 20229 se reconoce como criterio diagnóstico de mastocitosis la presencia de una mutación activante de KIT en MO y/u otros tejidos extracutáneos, incluida la SP. Además, en los actuales algoritmos diagnósticos de consenso se recomienda que, en aquellos pacientes que presentan un MCAS en ausencia de mastocitosis en la piel, se realice un primer rastreo diagnóstico de la mutación de KIT en SP10. No obstante a todo lo anteriormente expuesto, hoy sabemos que el estudio de la mutación de KIT en SP con los métodos y estrategias disponibles actualmente, se asocia a una elevada tasa de resultados falsos negativos, particularmente en pacientes con bajo grado de infiltración por mastocitos patológicos, como el MMAS, la BMM y, en menor medida, también la ISM7,8, siendo necesario el uso de métodos y estrategias aún más sensibles para su detección11,12. Al constituir la mutación de KIT un marcador genético casi universal de enfermedad clonal del mastocito (p.ej., MMAS y mastocitosis), y que está presente en todos los subtipos diagnósticos de mastocitosis, podemos decir que, por sí misma, esta mutación no explica la diversidad en el comportamiento clínico-biológico y evolutivo de los pacientes que son portadores de la misma. En este sentido, desde el año 2013, se ha identificado la presencia de alteraciones adicionales en otros genes diferentes a KIT13. Estas alteraciones genéticas adicionales a KIT afectan de forma recurrente, principalmente, a genes implicados en modificaciones epigenéticas, en el procesamiento alternativo del ARN y en el control transcripcional14–16. La presencia de mutaciones en estos grupos de genes afecta de forma muy característica a pacientes con AdvSM, y cobra especial relevancia en los pacientes con SM-AHN ya que, en muchas ocasiones, se tata de alteraciones genéticas compartidas con otras neoplasias mieloides como las MPN, la CMML o la AML17,18. La información disponible actualmente sobre la posible relación molecular existente en pacientes con SM-AHN entre ambos compartimentos de células neoplásicas es muy limitada, y ofrece resultados contradictorios19–21. No obstante, los resultados de estos estudios preliminares sugieren que, mientras que en algunos pacientes coexistiría la mutación de KIT y/o las alteraciones genéticas asociadas a la AHN, tanto en el mastocito como en las células neoplásicas de la AHN, en otros casos la presencia de la mutación de KIT y las alteraciones genéticas asociadas a la otra hemopatía estarían restringidas al mastocito y al compartimento de células de la AHN, respectivamente19,21–24. Ante esta situación, cabe preguntar si la existencia de distintos perfiles oncogenéticos en pacientes con SM-AHN podría explicar, al menos en parte, la heterogeneidad observada en su comportamiento clínico y evolutivo. En este sentido, hoy seguimos sin conocer con precisión el tipo y frecuencia de los distintos perfiles oncogenéticos presentes en pacientes con SM-AHN y su impacto en el comportamiento clínico y pronóstico de la enfermedad. De forma similar a lo descrito en las AdvSM en general, y la SM-AHN en particular, en relación con la presencia de alteraciones genéticas adicionales a la mutación de KIT, recientemente se ha descrito un nuevo rasgo genético que podría estar estrechamente relacionado con la patología mastocitaria, particularmente con los MCAS: HαT25. En este contexto, se ha referido que la presencia de HαT podría conllevar una elevación constitutiva de los niveles de sBT, tanto en pacientes con MCAS como en la población general, con un posible efecto de dosis génica en los mismos: a mayor cantidad de copias de triptasa-α, niveles más elevados de sBT26,27. Además, se ha referido que, la presencia de HαT en pacientes con MCAS podría asociase a una sintomatología relacionada con la liberación de mediadores mastocitarios más severa28. Sin embargo, en el momento de iniciar esta tesis doctoral seguíamos sin conocer la verdadera frecuencia de este rasgo genético en pacientes con MCAS y distintos subtipos diagnósticos de mastocitosis, respecto a su prevalencia en la población general residente en la misma área geográfica de los pacientes. También seguíamos sin conocer cómo influye este rasgo genético en el desarrollo y la modulación de los síntomas en pacientes con MCAS y mastocitosis. Ante estos antecedentes, en la presente tesis doctoral partimos de la hipótesis de que cada tipo y subtipo de enfermedad clonal que afecta al mastocito podría presentar un perfil genético característico hereditario y/o adquirido junto a la mutación de KIT, con efecto directo o indirecto sobre el comportamiento clínico, biológico y evolutivo de la enfermedad. Partiendo de esta hipótesis, planteamos como objetivo general de este trabajo evaluar la prevalencia, el posible significado patogénico y la utilidad clínica de diversos marcadores genéticos, tanto para el diagnóstico precoz como la clasificación de pacientes con MCAS y mastocitosis, estableciendo para ello, y de forma previa, una distribución entre enfermedad no-clonal y clonal de mastocito en base a la ausencia vs. presencia de una mutación en el gen KIT, detectada mediante técnicas ultrasensibles. Con este propósito, nos hemos propuesto cuatro objetivos específicos: • Determinar la prevalencia de HαT en la población general residente en España y comparar su prevalencia con la observada entre pacientes con MCAS y mastocitosis, determinando, además, la posible relación existente entre el número de copias del gen TPSAB1 y el comportamiento clínico de ambos grupos de enfermedades. • Investigar la posible utilidad de la detección de la mutación de KIT p.D816V mediante técnica de ASOqPCR en SP (vs. MO) para el cribado diagnóstico de pacientes con MCAS y/o sospecha de padecer una SM, y determinar el impacto pronóstico de la carga alélica de esta mutación y su cinética en la SM. • Evaluar la utilidad de un nuevo método ultrasensible, basado en un ensayo de tipo SuperRCA, para la detección de la mutación de KIT p.D816V en SP y MO, y determinar su precisión diagnóstica frente al método de referencia de ASOqPCR. • Definir la jerarquía clonal y la relación genética entre los distintos compartimentos de células tumorales coexistente en pacientes con mastocitosis sistémica asociada a otra neoplasia hematológica, con el fin de identificar distintos perfiles oncogenéticos, determinar su frecuencia y conocer su impacto en el comportamiento clínico y evolutivo de este grupo de pacientes. 2025-01-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/170303 [ES] Las enfermedades neurológicas y el glioblastoma (GBM) son trastornos graves del sistema nervioso y constituyen una causa importante de discapacidad y mortalidad. Los mecanismos que subyacen a estas alteraciones y la patogénesis del GBM siguen siendo poco comprendidos. En consecuencia, no existen terapias efectivas y la supervivencia es muy baja. Profundizar en su conocimiento e identificar nuevas estrategias terapéuticas resulta esencial. En este contexto, dilucidar cómo la remodelación de la cromatina y las modificaciones de ARN regulan la respuesta al daño en el ADN (DDR) y el sistema inmune pueden aportar nuevas perspectivas sobre los procesos neurodegenerativos y oncológicos del sistema nervioso. La primera parte del estudio analizó los defectos moleculares y funcionales causados por variantes patogénicas raras en vaccinia-related kinase 1 (VRK1), una quinasa nuclear mutada en pacientes con trastornos neurológicos. Nos centramos en las variantes L200P y R387H, identificadas en un paciente con neuropatía motora de inicio temprano y signos piramidales. Los defectos en la DDR pueden contribuir a estas patologías, ya que las neuronas son especialmente sensibles al daño genómico. Además, se han descrito alteraciones en la remodelación de la cromatina en pacientes con enfermedades similares. Nuestros resultados mostraron que las variantes alteraron la estabilidad y la actividad quinasa de VRK1, causando defectos en la señalización temprana de la DDR y un aumento de marcas de histonas represivas, que pueden reducir la accesibilidad de la cromatina e inducir represión génica. La segunda parte tuvo como objetivo dilucidar el papel de los reguladores epigenéticos y epitranscriptómicos en GBM. La resistencia a temozolomida (TMZ), el tratamiento estándar, y el microambiente tumoral (TME) inmunosupresor son los principales obstáculos para una terapia eficaz. En este contexto, la quinasa VRK1 y la ARNt metiltransferasa METTL1 surgieron como posibles dianas terapéuticas que actúan mediante mecanismos complementarios: remodelación de la cromatina y regulación post-transcripcional. La inhibición de VRK1 redujo las marcas activadoras de histonas y aumentó las represivas, promoviendo probablemente la compactación de la cromatina e influyendo en la iniciación de la DDR. METTL1 se encontró sobreexpresada en GBM y asociada con peor pronóstico. Mediante modelos in vitro e in vivo, demostramos que la pérdida de METTL1 redujo la proliferación, incrementó la sensibilidad a TMZ, por la acumulación de daño génico, y desplazó el TME hacia estados más antitumorales, limitando la progresión tumoral. El mecanismo molecular subyacente probablemente implica una reprogramación de la traducción debido a la pérdida de la modificación N7- metilguanosina (m7G) en los ARNt. En conjunto, la inhibición de VRK1 o METTL1 representa una estrategia terapéutica prometedora para el GBM.; [EN] Neurological diseases and glioblastoma (GBM) are major conditions of the nervous system and main causes of disability and mortality worldwide. The mechanisms underlying neurological disorders and GBM pathogenesis remain poorly understood. Consequently, eJective therapies are lacking, and patient survival remains very poor. Therefore, there is an urgent need to better understand these conditions and identify new therapeutic approaches. In this context, elucidating how chromatin remodeling and RNA modifications regulate the DNA damage response (DDR) and immune function may provide insights into both neurodegenerative and oncogenic processes within the nervous system. The first part of the study investigated the molecular and functional defects caused by rare pathogenic variants in vaccinia-related kinase 1 (VRK1), a nuclear kinase found mutated in patients with neurological disorders. We especially focused on the L200P and R387H variants, recently identified in a patient with juvenile-onset motor neuropathy presenting with pyramidal signs. Defects in the DDR can contribute to neurological diseases, as neurons are particularly sensitive to the accumulation of DNA damage. Moreover, alterations in chromatin remodeling have been reported in patients with these diseases. We demonstrated that these two variants altered VRK1 stability and reduced kinase activity, leading to defective early DDR signaling, and increased accumulation of repressive histone marks, which may promote reduced chromatin accessibility and gene repression. The second part of this study aimed to elucidate the role of epigenetics and epitranscriptomic regulators in GBM. Resistance to temozolomide (TMZ), the current standard therapy, and the highly immunosuppressive tumor microenvironment (TME) constitute major challenges to eJective treatment. In this context, the kinase VRK1 and the tRNA methyltransferase METTL1) emerged as potential therapeutic targets acting through complementary mechanisms, chromatin remodeling and post-transcriptional regulation. Our results showed that VRK1 inhibition reduced activating histone marks and increased repressive ones, likely promoting chromatin compaction, and influencing the initiation of the DDR. On the other hand, METTL1 was found to be overexpressed in GBM and associated with poor prognosis. Using in vitro and in vivo models, we demonstrated that METTL1 loss reduced cell proliferation, enhanced sensitivity to TMZ through DNA damage accumulation, and shifted the TME toward a more antitumoral state, thereby limiting tumor progression. The underlying molecular mechanism likely involves translation reprogramming due to the absence of the N7- methylguanosine (m7G) modification in tRNAs. Altogether, inhibition of VRK1 or METTL1 may represent promising new therapeutic approaches for GBM. 2025-01-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/169995 [ES] Belantamab mafodotin (belamaf) es un conjugado anticuerpo-fármaco dirigido contra BCMA con una actividad prometedora para el mieloma múltiple en recaída/refractario (RRMM) en regímenes basados en combinaciones. Sin embargo, debido a su reciente introducción, aún no se conocen bien sus mecanismos de resistencia. Esta tesis tuvo como objetivo evaluar el potencial terapéutico de las combinaciones basadas en belamaf y esclarecer los mecanismos implicados en la resistencia adquirida, mediante modelos preclínicos y el análisis de datos clínicos. La combinación de belamaf con daratumumab mostró sinergia en líneas celulares de mieloma múltiple y modelos murinos, aumentando la citotoxicidad a dosis bajas y promoviendo la muerte celular inmunogénica. Para modelar la resistencia, se generaron líneas celulares resistentes a belamaf y se sometieron a análisis transcriptómicos y genómicos, que revelaron pérdida de expresión de BCMA y activación de vías asociadas a la respuesta inmune, la fosforilación oxidativa y la regulación del ciclo celular. La validación funcional demostró que la sobreexpresión estable de BCMA restauró completamente la sensibilidad a belamaf en uno de los modelos, mientras que en el otro solo se observó una recuperación parcial, lo que sugiere la implicación de mecanismos adicionales. Para explorar el impacto inmunológico de belamaf en un contexto clínico, se analizaron los perfiles inmunes de los pacientes incluidos en el ensayo GEM Bela-VRd, que evalúa la adición de belamaf al esquema estándar VRd (bortezomib, lenalidomida, dexametasona) en pacientes con mieloma múltiple de nuevo diagnóstico y candidatos a trasplante. Se observó una reducción de linfocitos totales y células T CD4+ en sangre periférica, sin evidencias de un fenotipo exhausto en las células efectoras. Los análisis exploratorios también mostraron una disminución progresiva de las células plasmáticas malignas y un aumento en la expresión de marcadores asociados con muerte celular inmunogénica. El recuento absoluto de linfocitos totales, células T CD8+ y células NK surgió como un posible biomarcador de respuesta, con valores más altos asociados a respuestas más profundas, tanto en el ciclo 3 como al final de la inducción. En conjunto, estos hallazgos aportan una justificación preclínica sólida para el desarrollo clínico de la combinación de daratumumab y belamaf. Paralelamente, nuestros análisis de inmunomonitorización en el ensayo GEM Bela-VRd subrayan la relevancia de seguir el perfil inmune durante el tratamiento, ofreciendo biomarcadores potenciales para guiar la evaluación de la respuesta en el mieloma múltiple.; [EN] Belantamab mafodotin (belamaf) is an antibody-drug conjugate targeting BCMA with promising activity for relapsed/refractory multiple myeloma (RRMM) in combination-based regimens. However, due to its recent introduction, its resistance mechanisms are not yet fully understood. This thesis aimed to evaluate the therapeutic potential of new belamaf-based combinations and to elucidate mechanisms underlying acquired resistance, both through preclinical models and clinical data analysis. The combination of belamaf and daratumumab exhibited strong synergy in multiple myeloma cell lines and mouse models, enhancing cytotoxicity at low doses and promoting immunogenic cell death. To model resistance, belamaf-resistant cell lines were generated and subjected to transcriptomic and genomic profiling, revealing BCMA loss, and activation of immune response, oxidative phosphorylation, and cell cycle regulation pathways. Functional validation demonstrated that stable overexpression of BCMA fully restored belamaf sensitivity in one model, while only partial restoration was observed in the other model of resistance, suggesting the implication of additional mechanisms. To further explore the immunological impact of belamaf in a clinical setting, we analyzed immune profiles from patients enrolled in the GEM Bela-VRd trial, which investigates the addition of belamaf to the standard VRd regimen (bortezomib, lenalidomide, dexamethasone) in newly diagnosed transplant-eligible MM patients. We observed a reduction in total lymphocyte and CD4+ T cells in peripheral blood, without producing an exhausted phenotype in effector cells. Exploratory analyses also showed a progressive reduction in malignant plasma cells and increased expression of markers associated with immunogenic cell death. Absolute counts of total lymphocytes, CD8+ T cells and NK cells emerged as potential biomarkers of response, with higher counts associated with deeper responses, both at cycle 3 and end of induction therapy. Together, these findings provide a strong preclinical rationale for the clinical development of the daratumumab and belamaf combination. In parallel, our immunomonitoring analyses within the GEM Bela-VRd clinical trial highlight the relevance of tracking immune profiles during treatment, offering potential biomarkers to guide response assessment in multiple myeloma. 2025-01-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/167325 [ES] PCNA (Antígeno nuclear de células en proliferación) es una proteína esencial, altamente conservada a lo largo de la evolución, desde bacterias hasta mamíferos. Esta molécula, que actúa abrazando al ADN, orquesta numerosos procesos relacionados con la replicación y reparación del genoma. PCNA sirve como plataforma sobre la que se unen distintas proteínas para realizar sus funciones sobre el ADN, como por ejemplo las ADN polimerasas Pol ε y Pol δ. Uno de los mecanismos moleculares que permite a PCNA dirigir qué proteínas o rutas señalizadoras deben actuar es su modificación postraduccional (PTM). Particularmente relevante para este trabajo es la modificación de PCNA mediante la adición de subunidades de ubiquitina. Tradicionalmente, esta PTM ocurre cuando las polimerasas Pol ε y Pol δ se bloquean porque su centro catalítico no se puede adaptar a una lesión en el ADN. Para evitar el colapso del proceso replicativo, PCNA se ubiquitina, activando así las denominadas rutas de tolerancia al daño en el ADN (DDT, del inglés DNA Damage Tolerance). Estas vías permiten atravesar las lesiones y continuar la replicación. Sin embargo, dado que estas rutas conllevan ciertos riesgos para la integridad genómica, deben estar estrictamente reguladas. La forma de desactivarlas es mediante la eliminación de las marcas de ubiquitina en PCNA por acción de desubiquitinasas. En Saccharomyces cerevisiae, el organismo modelo de este estudio, antes de comenzar este trabajo se conocían dos desubiquitinasas de PCNA (PCNA-DUBs): Ubp10 y Ubp12. Estas proteasas colaboran regulando las rutas DDT de forma asimétrica en las dos hebras del ADN, las cuales, además, se replican mediante mecanismos distintos. La hebra líder se replica de manera continua, mientras que la hebra rezagada lo hace de forma discontinua, mediante la síntesis de millones de fragmentos cortos conocidos como Fragmentos de Okazaki, que posteriormente se procesan y unen para formar una hebra continua en un proceso denominado maduración de fragmentos de Okazaki (OFM). En este trabajo partimos de la identificación de una nueva PCNA-DUB, Ubp1. Aunque esta proteína se había descrito exclusivamente como citoplasmática, aquí identificamos una subpoblación nuclear que participa en la desubiquitinación de PCNA. Colaborando con las ya conocidas Ubp10 y Ubp12, Ubp1 contribuye a evitar la acumulación de PCNA ubiquitinado durante la replicación del ADN. La eliminación combinada de estas tres proteínas provoca la acumulación crónica de PCNA ubiquitinado incluso en condiciones no perturbadas, es decir, en ausencia de daño exógeno al ADN. En este contexto, establecemos una relación causa-efecto entre dicha acumulación crónica y un proceso replicativo lento e ineficiente. Además, demostramos que, bajo condiciones de estrés replicativo, cuanto mayor es el defecto en la desubiquitinación de PCNA debido a la ausencia de las PCNA-DUBs, mayor es la acumulación de estructuras replicativas asociadas a las rutas de tolerancia al daño, determinando una correlación directa entre ambos fenómenos.Por otro lado, este trabajo también explora el posible papel de la desubiquitinación de PCNA en la replicación de la hebra rezagada, concretamente durante la maduración de los fragmentos de Okazaki (OFM). En este contexto, demostramos que Ubp10 participa directamente en dicho proceso a través de su actividad desubiquitinadora sobre PCNA. La ausencia de Ubp10 provoca un defecto en este proceso, lo que conduce a una acumulación patológica de PCNA en la cromatina. Esta retención anómala constituye la causa última de una maduración incorrecta de los fragmentos de Okazaki, impidiendo que sean ligados en el tiempo adecuado. Determinamos que estos defectos derivados de la pérdida de Ubp10 son completamente suprimidos mediante el uso de alelos inestables de PCNA, que favorecen su descarga espontánea de la cromatina. Finalmente, concluimos que esta OFM defectiva, consecuencia directa de la falta de Ubp10, en última instancia provoca un defecto replicativo a lo largo de todo el genoma, que se manifiesta como una duplicación del ADN lenta e ineficiente.; [EN] PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigen) is an essential protein highly conserved throughout evolution, from bacteria to mammals. PCNA acts as a sliding clamp that encircles DNA, coordinating numerous processes involved in DNA replication and repair. It functions as a platform that recruits and organizes numerous protein partners, such as DNA polymerases Pol ε and Pol δ, to carry out their functions on the genome. One of the key molecular mechanisms through which PCNA directs protein recruitment and pathway choice is its post-translational modification (PTM). Particularly relevant to this work is the ubiquitylation of PCNA, which typically occurs when DNA polymerases are stalled due to DNA lesions that block their catalytic activity. In response, PCNA becomes ubiquitylated, triggering the DNA damage tolerance (DDT) pathways, allowing replication to bypass DNA lesions. However, because these pathways carry inherent risks for genomic instability, they must be tightly regulated. Their timely inactivation depends on the removal of ubiquitin moieties from PCNA by specific deubiquitylating enzymes. In Saccharomyces cerevisiae, the model organism used in this study, two PCNA-specific deubiquitylases (PCNA-DUBs) have been characterized to date: Ubp10 and Ubp12. These two PCNA-DUBs regulate DDT asymmetrically on the two DNA strands, which are replicated through distinct mechanisms. While the leading strand is synthesized continuously, the lagging strand is replicated discontinuously through the synthesis of millions of short DNA segments known as Okazaki fragments. These are later processed and ligated into a continuous strand during the Okazaki Fragment Maturation (OFM) process. In this work, we identify and characterize a novel PCNA-DUB, Ubp1. Previously reported as an exclusively cytoplasmic protein, we now demonstrate the existence of a nuclear subpopulation of Ubp1 that participates in PCNA deubiquitylation. Collaborating with Ubp10 and Ubp12, Ubp1 contributes to the prevention of PCNA ubiquitylation accumulation during DNA replication. Combined deletion of these three PCNA-DUBs leads to chronic accumulation of PCNA-K164 ubiquitylation even under unperturbed conditions, in the absence of exogenous DNA damage. We establish a direct causal link between this persistent ubiquitylation and delayed defective DNA replication. Moreover, we demonstrate that under replication stress, the greater the defect in PCNA deubiquitylation due to the absence of PCNA-DUBs, the higher the accumulation of replication intermediates associated with DNA damage tolerance pathways, revealing a direct correlation between them. Furthermore, this study also explores a role for PCNA deubiquitylation in lagging-strand replication, specifically during OFM. We show that Ubp10 directly participates in this process through its PCNA deubiquitylation activity. Loss of Ubp10 results in defective deubiquitylation, leading to pathological retention of PCNA on chromatin. This unscheduled retention disrupts timely OFM, preventing proper ligation of Okazaki fragments. We demonstrate that defects arising from Ubp10 loss are fully suppressed by disassembly-prone PCNA mutants, which promote spontaneous PCNA unloading from chromatin. Ultimately, we conclude that defective OFM due to Ubp10 depletion leads to a genome-wide replication defect, manifested as slow and inefficient DNA synthesis. 2025-01-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/166506 [EN] Prostate cancer (PCa) is the most prevalent cancer in men worldwide. Although it initially responds well to androgen deprivation therapy, it frequently progresses to a lethal, castration-resistant stage characterized by poor immune infiltration and therapy resistance. Although transcriptional and epigenetic mechanisms underlying PCa progression have been extensively studied, the contribution of RNA modifications to tumor evolution and immune remodeling remains poorly understood. In this thesis, we addressed this knowledge gap through two complementary projects focused on the role of RNA-modifying enzymes in shaping the tumor microenvironment. The first part of this study investigated the function of METTL1, a tRNA methyltransferase, in regulating immune responses in prostate cancer. Using in vitro and in vivo models, we demonstrated that loss of METTL1 activates interferon signaling via STAT1, promoting a pro-inflammatory tumor milieu characterized by increased M1 macrophages and CD8+ T cell infiltration. METTL1 depletion also enhanced the efficacy of immune checkpoint blockade therapies in preclinical models, positioning METTL1 as a promising target to sensitize otherwise immunologically "cold" prostate tumors. The second part employed single-cell transcriptomics and multiplex immunofluorescence to characterize epithelial–immune crosstalk during PCa progression. We identified castration-resistant epithelial subpopulations with proliferative and stem-like features, including cells enriched for the RNA methyltransferase Pcif1. Pcif1+ epithelial cells exhibited transcriptional programs linked to immune modulation, tissue remodeling, and spatial proximity to regulatory T cells and exhausted CD8+ T cells. Furthermore, Pcif1+ cells selectively engaged in immunosuppressive ligand–receptor interactions with myeloid and lymphoid compartments, contributing to the establishment of a tumor-permissive niche. Together, these findings reveal RNA modifications as critical regulators of tumor–immune interactions in prostate cancer. By modulating cytokine profiles, immune cell recruitment, and cell-cell communication, RNA-modifying enzymes such as METTL1 and PCIF1 play pivotal roles in promoting tumor progression and immune evasion. Targeting these pathways, either through direct inhibition of RNA modifiers or by disrupting specific epithelial–immune interactions, may offer novel therapeutic strategies to improve immunotherapy responses in prostate cancer. [ES] El cáncer de próstata (CaP) es el más prevalente en hombres a nivel mundial. Aunque inicialmente responde bien a la terapia de privación androgénica, frecuentemente progresa hacia un estadio resistente a la castración y letal, caracterizado por escasa infiltración inmune y resistencia terapéutica. Aunque los mecanismos transcripcionales y epigenéticos en la progresión del CaP han sido ampliamente estudiados, el papel de las modificaciones de ARN en la evolución tumoral y la remodelación inmune sigue siendo poco conocido. En esta tesis, abordamos esta cuestión mediante dos proyectos complementarios centrados en el papel de las enzimas modificadoras de ARN en la configuración del microambiente tumoral. La primera parte de este estudio analiza la función de METTL1, una metiltransferasa de ARN de transferencia, en la regulación de respuestas inmunes en el CaP. Usando modelos in vitro e in vivo, demostramos que su pérdida activa la señalización de interferón a través de STAT1, promoviendo un entorno tumoral proinflamatorio caracterizado por un aumento de macrófagos M1 y linfocitos T CD8+. Además, la depleción de METTL1 mejoró la eficacia de la inmunoterapia en modelos preclínicos, posicionándola como una diana prometedora para sensibilizar tumores de próstata inmunológicamente "fríos". La segunda parte empleó transcriptómica de célula única e inmunofluorescencia multiplexada para caracterizar la interacción epitelio-inmunidad durante la progresión del CaP. Identificamos subpoblaciones epiteliales resistentes a la castración con características proliferativas y de tipo célula madre, incluyendo células enriquecidas en Pcif1. Estas células exhibieron programas asociados a modulación inmune, remodelación tisular y proximidad a células T reguladoras y T CD8+ exhaustas. Además, establecieron interacciones ligando-receptor inmunosupresoras específicas con las poblaciones mieloides y linfoides, contribuyendo a un nicho tumoral permisivo. En conjunto, estos hallazgos revelan que las modificaciones de ARN son reguladores clave de las interacciones tumor–inmunidad en el CaP. Al modular perfiles de citocinas, reclutamiento de células inmunes y comunicación celular, las enzimas como METTL1 y PCIF1 desempeñan un papel crucial en la progresión tumoral y la evasión inmune. El bloqueo de estas vías, ya sea mediante inhibición directa de modificadores de ARN o mediante la disrupción de interacciones epitelio–inmunidad específicas, podría ofrecer nuevas estrategias terapéuticas para mejorar la respuesta inmunoterapéutica en el CaP. 2025-01-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/165851 [ES]Esta Tesis Doctoral se centra en las neoplasias derivadas de los dos grupos celulares referidos (linfocitos T y células NK). Los síndromes linfoproliferativos crónicos de células T y NK (SLPC-T/NK) engloban a un grupo muy heterogéneo de neoplasias derivadas de linfocitos T y NK maduros, algunas de las cuales tienen mal pronóstico y un curso agresivo. Actualmente, el diagnóstico de estas neoplasias y su posterior clasificación en categorías diagnósticas de acuerdo con la Organización Mundial de la Salud (OMS) o la Clasificación de Consenso Internacional (ICC) supone un reto, debido a su gran heterogeneidad clínico-biológica, la carencia de marcadores moleculares/genéticos en la mayoría de las categorías diagnósticas y su baja incidencia (10-15% de los linfomas no-Hodgkin). El diagnóstico de la clonalidad de células T/NK en pacientes con sospecha de SLPC-T/NK es difícil debido a que las células T malignas/clonales y las células T normales/policlonales presentan características tanto morfológicas como inmunofenotípicas similares. 2025-04-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/165834 [ES]La mastocitosis sistémica (SM) constituye un grupo de enfermedades con un comportamiento clínico variable, caracterizadas por la acumulación de mastocitos patológicos clonales en múltiples órganos y tejidos, entre los que se incluyen habitualmente la piel, la médula ósea, el hígado y la mucosa del tracto gastrointestinal. La mutación D816V del protooncogén KIT constituye la alteración genética característica de la SM, estando presente en alrededor del 90% de los casos. Dicha mutación provoca una ganancia de función en el dominio tirosina quinasa del receptor Kit, que hace que el mastocito portador de esta alteración se active de forma constitutiva. Merece destacar sin embargo, que esta mutación se encuentra indistintamente en todas las formas de SM, a pesar de la heterogeneidad clínica que presentan los pacientes, lo cual sugiere que por sí sola, la mutación KITD816V no pueda explicar el comportamiento clínico-biológico variable de la enfermedad. Actualmente sabemos que los mastocitos activados constitutivamente por KITD816V exhiben una liberación incrementada de mediadores mastocitarios, que además de actuar sobre las células epiteliales y estromales del micromedioambiente tumoral, podrían activar y ejercer efectos directos (o indirectos) sobre otras células de la inmunidad innata y adaptativa. Así, se ha descrito que el mastocito puede modular la migración de DC, y su función, regulando además, los procesos de maduración, procesamiento de antígenos y activación de células T. Todo ello apunta a que el mastocito pueda ejercer también un papel importante en la inmunidad adaptativa, induciendo la activación, reclutamiento, proliferación y producción de citoquinas por parte de las células T, y modulando la polarización de los linfocitos T colaboradores hacia la producción de diferentes patrones de citoquinas. Así mismo, el mastocito puede inducir el cambio de clase de Ig en linfocitos B, promoviendo su diferenciación a células B de memoria productoras de IgE y PC secretoras de IgE (e IgA). Esto le confiere al mastocito, un papel relevante en la respuesta alérgica mediada por IgE, así como en la homeostasis de bacterias comensales en el tracto gastrointestinal, donde las citoquinas y otros mediadores liberados por el mastocito pueden inducir además, un aumento de la permeabilidad de la barrera mucosa, con efectos indirectos sobre la respuesta inmunitaria local y sistémica. Si tenemos en cuenta el importante papel inmunomodulador que ostenta el mastocito sobre otras células y componentes de la inmunidad innata y adaptativa en situaciones fisiológicas, ya sea por contacto directo, mediante la liberación de mediadores y exosomas, o de forma indirecta mediante el aumento de permeabilidad de mucosas, cabe plantear la posibilidad de que los mastocitos clonales de pacientes con mastocitosis portadores de una mutación activante de KIT, al estar constitutivamente activados, puedan ejercer un importante papel inmunomodulador sobre el resto de células inmunes, además de los efectos que ejercen sobre las células epiteliales y estromales de los tejidos en los que se localizan. Todo ello podría conllevar una alteración de la respuesta inmunitaria en estos pacientes, y por consiguiente, tener un impacto relevante en la fisiopatología y el comportamiento clínico de la enfermedad. En este sentido, en los últimos años se han acumulado un número cada vez mayor de evidencias que apuntan hacia la existencia de perfiles inmunes alterados en pacientes con SM. Entre otras alteraciones, estas incluyen una disminución anormalmente acentuada de células T CD8+ y NK en sangre periférica, junto a cifras elevadas de ILC2 y niveles anormalmente altos de IL-6 en plasma, aparentemente independientes de los niveles de expresión observados en los mastocitos de pacientes con SM. Sin embargo, estos hallazgos con frecuencia se ven limitados por el escaso número de pacientes analizados, por limitarse a un único subtipo diagnóstico de SM y por no profundizar en la identificación dentro de las distintas poblaciones mayoritarias de las células inmunes, de las subpoblaciones funcionales o madurativas concretas que estarían afectadas. Una limitación adicional de los estudios publicados hasta la fecha sobre los perfiles de alteración inmune en SM radica en la ausencia de valores de referencia normales apropiados, a la hora de definir las alteraciones características de la enfermedad para las diferentes variables inmunes analizadas, que hoy sabemos, se ven en gran medida influidas por la edad de cada individuo, entre otros factores. Ante estos antecedentes, en esta tesis doctoral nos planteamos la hipótesis de que la activación constitutiva de los mastocitos provocada por las mutaciones activantes de KIT presentes en la práctica totalidad de los pacientes con SM, podría tener efectos directos e indirectos sobre el micromedioambiente tumoral, incluidas las células del sistema inmune, generando cambios estructurales y funcionales en las mismas, que conllevarían a una respuesta inmunitaria desregulada que pudiera influir y condicionar, al menos en parte, el comportamiento clínico de la enfermedad en los distintos subtipos diagnósticos de SM. Partiendo de esta hipótesis, nos propusimos como objetivo general evaluar el estado del sistema inmune en su conjunto, con especial énfasis en los compartimentos monocítico, de células dendríticas y de linfocitos B y T de sangre periférica, como reflejo a nivel sistémico de las alteraciones tisulares subyacentes. En base a ello, los hallazgos descritos en esta tesis doctoral muestran, que los monocitos circulantes de pacientes con SM están constitutivamente activados y funcionalmente agotados contribuyendo al aumento de los niveles en plasma de una amplia variedad de citoquinas inflamatorias con efectos pleiotrópicos sobre otras células y tejidos del micromedioambiente tumoral, poniendo de manifiesto la existencia de una activación crónica de la inmunidad innata en la SM, que sería transversal a los distintos subtipos diagnósticos de la enfermedad. Esta alteración funcional además, se asocia a una redistribución de sus subpoblaciones, consistente en una disminución de los monocitos intermedios y las subpoblaciones más maduras de monocitos no clásicos en la SM en general, y a un mayor recuento de monocitos recién producidos CD62L+ en la mastocitosis sistémica agresiva (ASM) en particular, lo cual podría reflejar una migración incrementada de las subpoblaciones de monocitos más diferenciadas desde la sangre a los tejidos periféricos, asociada a una mayor producción medular de monocitos clásicos en las formas más avanzadas de la enfermedad. Los pacientes con SM muestran por otro lado, perfiles distintos de alteración de la distribución de los diferentes compartimentos de células dendríticas circulantes, asociados a un incremento del número de células dendríticas Axl+ en la mastocitosis de médula ósea (BMM, del inglés bone marrow mastocytosis) y un descenso progresivamente más acentuado de las células dendríticas plasmocitoides y de distintas subpoblaciones de mDC, desde la BMM a la ISM (mastocitosis sistémica indolente) y la ASM. Estos hallazgos confirman la existencia en la SM de alteraciones estructurales importantes en la inmunidad innata, sugiriendo que estas puedan afectar además a la respuesta adaptativa, y en especial al compartimento de linfocitos T, con posibles implicaciones clínicas. Respecto a la respuesta inmunitaria adaptativa, los pacientes con SM presentan una disminución significativa del número de células T CD8+ citotóxicas y NK en sangre, asociada a un descenso de algunas subpoblaciones efectoras de linfocitos T CD4+ de tipo Th1, Th2 y Tregs Th1, y un aumento significativo de células naive T CD4- y linfocitos T CD4+ TFH. Estos hallazgos parecen reflejar una mayor producción de linfocitos T, asociada a una mayor migración desde la sangre a tejidos periféricos de algunos de los compartimentos de células T citotóxicas, NK, y T CD4+ efectoras, presumiblemente debidos a una mayor permeabilidad de las barreras cutánea y/o mucosa. Además, los pacientes con ASM mostraron una disminución generalizada de múltiples subpoblaciones de células T, asociada a un ligero aumento de linfocitos naive TCD4-, mientras de los pacientes con BMM e ISM exhibían un aumento de distintas subpoblaciones de linfocitos TFH, incluidas las células TFH naive, reflejando la existencia de diferentes perfiles de respuesta inmunitaria adaptativa en los distintos subtipos diagnósticos de SM. Por otro lado, la asociación de un genotipo hipertriptasemia hereditaria con SM se correlacionó con un aumento del recuento en sangre de células T proinflamatorias Th17, Th1/Th17 y Th22, sugiriendo por primera vez, la posible implicación de este rasgo genético asociado a niveles más elevados de sBT, en los perfiles de alteración inmune característicos de esta enfermedad, con posibles implicaciones clínicas. Al contrario de lo que ocurría en la ASM, el patrón de distribución de las distintas subpoblaciones de células T circulantes en sangre de pacientes con BMM e ISM con la mutación de KITD816V restringida al mastocito, se asoció con distintos perfiles de síntomas y manifestaciones clínicas de la enfermedad, como son la presencia de anafilaxia, historia de alergia a veneno, alteraciones óseas y síntomas asociados a la liberación de mediadores mastocitarios. Estos resultados ponen de manifiesto el posible papel de la inmunidad adaptativa como modulador del comportamiento clínico de la enfermedad, en las formas iniciales y de menor carga tumoral de SM. Por último, los hallazgos observados en la respuesta humoral de estos pacientes mostraron que los pacientes con SM presentan un incremento de la producción en médula ósea y de la liberación a sangre, de linfocitos B inmaduros y linfocitos B naive CD5+, asociado a un descenso generalizado y muy pronunciado de múltiples subpoblaciones de células plasmáticas circulantes, y valores normales de inmunoglobulinas totales en plasma, lo cual sugiere una migración incrementada de linfocitos B naive a tejidos periféricos, asociado a un desplazamiento de la respuesta humoral desde los órganos linfoides centrales a dichos tejidos. Además, el perfil de alteración de la respuesta humoral en los pacientes con SM difiere según el subtipo diagnóstico de la enfermedad, observándose un aumento de los niveles de IgE e IgD, junto a un descenso en los niveles de IgG en plasma en la BMM, que contrasta con el aumento de los valores plasmáticos de IgM de forma aislada o junto a la IgD en los pacientes diagnosticados de ASM e ISM, respectivamente. En su conjunto, estos resultados podrían reflejar la existencia de una desregulación en el tráfico de antígenos asociado a un aumento de la permeabilidad a nivel de las mucosas, potencialmente relacionados con una mayor liberación de mediadores asociados a la activación constitutiva de mastocitos patológicos a nivel local; quedan por conocer los mecanismos concretos responsables de estos perfiles diferenciales de la respuesta humoral observados en la BMM vs ISM vs ASM. 2024-01-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/164971 [ES]En primer lugar, se realizó un análisis de las características clínico patológicas de pacientes diagnosticadas de cáncer de mama en estadíos precoces HER 2 positivo en el CAUSA desde 2009 a 2021, siendo similar a lo referido en la literatura. También se analizó la respuesta completa patológica y la supervivencia libre de enfermedad a los 3 años. Al analizar la tasa de respuesta completa patológica se observó que era mayor en el grupo de pacientes que recibieron doble bloqueo antiHER2 como tratamiento neoadyuvante respecto al grupo el que sólo recibieron trastuzumab, al igual que se describe en la literatura. También se constató que existe relación entre respuesta completa patológica y supervivencia libre de enfermedad en el estudio, obteniéndose una disminución del riesgo de recidiva cuando se obtiene la respuesta completa patológica vs cuando no se alcanza. Seguidamente se desarrolló un modelo matemático predictivo de alcanzar la respuesta completa patológica tras un tratamiento neoadyuvante en cáncer de mama HER2 positivo basado en el Ki67, grado histológico, los receptores de estrógenos y los receptores de progesterona con una alta sensibilidad y especificidad. Por último, se desarrolló un modelo pronóstico de supervivencia libre de enfermedad en cáncer de mama HER 2 positivo tras tratamiento neoadyuvante basado en la obtención de la respuesta completa patológica, la expresión de receptores de estrógenos y el Ki67. Ambos modelos necesitarán confirmación de su validación con un tamaño muestral mayor. 2025-03-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/163810 [ES]Introducción. La resonancia magnética cardíaca (RMC) se ha establecido como una prueba de imagen fundamental en el diagnóstico de la patología cardiovascular. Sin embargo, se desconoce su potencial impacto clínico y económico en el manejo del paciente con sospecha de patología cardiaca en nuestro medio. Objetivo. Evaluar la utilidad clínica y el impacto sobre el tratamiento de la realización de una RMC en pacientes ingresados y ambulatorios de un centro terciario con RMC gestionada íntegramente por cardiología a los que se les solicita la misma; asimismo, evaluar el impacto económico de su realización en nuestro sistema sanitario. Métodos. Se realizó un estudio retrospectivo observacional de simulación de intervención y análisis de costes sobre el proceso asistencial cardiológico en una muestra aleatorizada de pacientes con RMC realizadas en un centro terciario con disponibilidad propia del escáner perteneciente al sistema público de salud. Resultados. A partir de la muestra total de 4046 RMC, se tomó una muestra aleatoria de 343 estudios. En el modelo de simulación el resultado de la RMC generaba un cambio de estrategia diagnóstica en un 35,3%, finalizaba el proceso asistencial diagnóstico en el 47,8% y ahorraba el 62,2% de los estudios planificados previamente; así como derivaba en cambios en el tratamiento en el 22,4%. En el análisis de costes, la suspensión de pruebas diagnósticas y cambio de tratamiento generó un ahorro de 1.944,8 € por paciente y 595,5 € por paciente en las RMC específicamente realizadas para estudio de viabilidad miocárdica y valoración de función sistólica; si bien, en el global de la muestra analizada, supuso un coste añadido de 27,1 € por paciente. Conclusiones. La información derivada de la RMC genera un importante impacto clínico, tanto diagnóstico como terapéutico, en el manejo de pacientes cardiológicos; asociando un ahorro económico significativo en indicaciones seleccionadas y un costo reducido en el resto de los pacientes; [EN]Background. Cardiac magnetic resonance (CMR) has been established as a crucial non-invasive test in the diagnosis of cardiovascular pathology. However, its potential value, clinical and economic, on the management of cardiac patients in our environment is unknown. Objective. To evaluate clinical utility, diagnostic test and treatment savings of performing a cardiac magnetic resonance (CMR) in patients admitted to the cardiac unit or out-hospital patients in a tertiary center with a CMR entirely managed by the cardiology unit. In addition, it was our purpose to evaluate the economic impact of this strategy in our sanitary system. Methods. A retrospective observational study, simulation of intervention, and cost analysis was carried out on a randomized sample of patients with CMR performed in a tertiary public healthcare centre. Results We randomly took a sample of 343 studies taken from the total of 4,046 CMR performed in our centre between december 2014 and December 2018. In the simulation model, the result of the CMR generated a change in the diagnostic strategy in 35.3%, the diagnostic work-up was finished in 47.8% and saved previously planned diagnostic studies in 62.2%; as well as it derived in treatment changes in 22.4% of the patients. In the cost analysis, the reduction of diagnostic tests and treatment changes generated a saving amount of 1,944.8 € per patient and 595.5 € per patient in those CMR specifically performed for ischemic heart disease and systolic function assessment; although in the overall sample, it represented an added cost of 27.1 € per patient. Conclusions The CMR-derived information generates an important diagnostic and therapeutic impact in the management of cardiac patients, leading to a significant economic saving in selected clinical indications, and a reduced added cost in the rest of the patients. 2024-12-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/163735 [ES]El propósito general del presente trabajo fue la caracterización clínica, terapéutica y pronostica de una población en la que se practica el cierre percutáneo de LPV, tomando como base la cohorte histórica de pacientes con LPV sintomático sometidos a dicho procedimiento en el Complejo Asistencial Universitario de Salamanca. El estudio se ha planteó con la intención de dar respuesta a los siguientes objetivos principales: conocer las características epidemiológicas y el perfil clínico de una población en la que se practica el cierre percutáneo de LPV; evaluar el éxito, efectividad y seguridad del cierre percutáneo de LPV ; analizar la supervivencia a largo plazo y la tasa de eventos cardiovasculares adversos en los pacientes sometidos a cierre percutáneo de LPV 2024-12-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/163717 [ES]En múltiples enfermedades, tanto en episodios agudos como en su cronificación, se ha observado una disfunción de la respuesta inmune (tanto a nivel celular como humoral). Entre estas patologías se encuentran COVID-19 y Leucemia Linfocítica Crónica (LLC). En ambos casos, se ha descrito cómo la disfunción de la respuesta inmune está relacionada con la dinámica de la respuesta humoral que, a su vez, se asocia con la evolución y el progreso de la enfermedad. En este sentido, diversos mecanismos pueden determinar la disfunción de la respuesta inmune como (1.) el reconocimiento, procesamiento y presentación antigénica, (2.) la regulación de la señalización intracelular, (3.) el microambiente celular mediante inmunosupresión y/o agotamiento celular. En su conjunto, se produce una disfunción de la respuesta humoral asociada a una progresión más rápida y agresiva de estas patologías. La caracterización de estos mecanismos subyacentes es una fuente muy valiosa para la determinación de biomarcadores de utilidad en el diagnóstico, pronóstico y evolución de la enfermedad. Asimismo, estos biomarcadores de disfunción inmune pueden tener potencial relevancia en la estratificación y el tratamiento de los pacientes. En esta Tesis Doctoral, se ha realizado una caracterización sistemática de la respuesta humoral mediante metodologías avanzadas de Proteómica Clínica (basadas en microarrays y en espectrometría de masas). Se han estudiado perfiles inflamatorios (mediante un panel de reactantes de fase aguda), presencia de autoanticuerpos, perfiles serológicos (IgM e IgG) frente a microorganismos más prevalentes y perfiles proteómicos diferenciales de células B para evaluar la señalización intracelular. Todo ello, permite evaluar las alteraciones en la respuesta humoral tanto en pacientes con COVID-19 como en pacientes con LLC, en distintos estadios de la enfermedad. Los resultados describen perfiles proteicos significativamente diferenciales de acuerdo a la gravedad y a la evolución en ambas enfermedades. En resumen, la caracterización proteómica, sistemática y exhaustiva de la respuesta humoral ha permitido establecer un panel de potenciales biomarcadores proteicos de interés tanto para el diagnóstico y pronóstico como para la estratificación de grupos de pacientes y su seguimiento clínico. 2024-12-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/163714 [ES]Estadísticas del cáncer colorrectal (CCR): analiza las estadísticas mundiales, europeas y españolas sobre incidencia y mortalidad por cáncer colorrectal. Trata sobre prevención y cribado: destaca la importancia de las estrategias de prevención y los programas de detección precoz. Realiza un enfoque regional: análisis detallado del cáncer colorrectal en España y regiones concretas como Zamora. Incluye estudios epidemiológicos sobre incidencia y mortalidad por cáncer en diferentes regiones y demografías. Finalmente trata sobre proyecciones futuras: anticipa las tendencias futuras en la incidencia del cáncer y el impacto de los cambios en el estilo de vida. Traducción realizada con la versión gratuita del traductor DeepL.com 2024-12-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/163651 [EN]VAV1 is a RHO guanine nucleotide exchange factor (GEF) predominantly expressed in hematopoietic cells, where it activates RHO GTPases —primarily RAC1—and plays essential roles in T cell development, immune response and cell signaling. Recent studies have elucidated VAV1’s involvement in various immune system pathologies and cancers, underscoring its therapeutic potential. Understanding the structure-activity relationship of VAV1 concerning its GEF-dependent and GEF-independent functions provides a foundation for developing specific VAV1 GEF inhibitors. In this thesis, we employed different drug design strategies to identify specific inhibitors of VAV1 GEF activity. We identified two pockets of interest within key regulatory domains of the protein that enabled to perform a virtual ligand screening of millions of compounds. From the hits obtained in this screening, we created a library of compounds designed based on two promising hits, introducing chemical modifications to improve initial VAV1 GEF inhibition. The activity of these compounds, asserted through VAV1—RAC1 nucleotide exchange assays, showed significant improvement following various chemical modifications. Further characterization of lead compounds was performed using biochemical and cellular assays to assess their specificity for VAV1 GEF inhibition. Additional strategies in this project included the design and synthesis of a stapled peptide targeting VAV1, as well as high-throughput screening of two large compound libraries. Overall, this thesis presents a comprehensive exploration of strategies for identifying and validating VAV1 GEF inhibitors, revealing promising candidates for further investigation 2024-12-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/163622 [ES]Esta tesis doctoral ha desarrollado y aplicado con éxito múltiples técnicas y algoritmos bioinformáticos para abordar y resolver desafíos específicos en la gestión, análisis e interpretación de datos ómicos complejos derivados de muestras humanas de cáncer. El trabajo se ha centrado en dos tipos principales de cáncer: el cáncer de mama (BRCA) y el cáncer colorrectal (CRC). Los datos ómicos se han integrado y analizado junto con información clínica relevante, principalmente datos de supervivencia y progresión de la enfermedad, así como otros parámetros clave como el estadio del tumor, el grado y la respuesta al tratamiento. El trabajo también aborda el campo de la farmacogenómica, explorando las correlaciones entre los fármacos antitumorales (como compuestos químicos pequeños) y la activación de genes humanos. Como comentario general final, este trabajo ha demostrado el potencial de integrar enfoques estadísticos avanzados y bioinformáticos con grandes conjuntos de datos de cáncer. Con ello hemos conseguido mejorar tanto el análisis de supervivencia como la identificación de dianas terapéuticas, con el objetivo final de optimizar la aplicación combinada de datos ómicos y clínicos para una mejor caracterización de los resultados de los pacientes con cáncer. Los métodos desarrollados no solo proporcionan herramientas valiosas para la investigación del cáncer, sino que también sientan una base sólida para futuras aplicaciones en el campo de la medicina personalizada. 2024-12-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/163582 [ES]Esta tesis doctoral analiza el papel de la reparación valvular mitral percutánea (RVMP) mediante técnica borde a borde en el tratamiento de la insuficiencia mitral funcional (IMF). En particular, se exponen los resultados de esta técnica en tres escenarios clínicos: 1) IMF en pacientes portadores de dispositivos cardiacos implantables (DCI); 2) la IMF de causa auricular (IMFa) y 3) la IMF aguda como complicación del infarto agudo de miocardio (IAM). A modo de introducción, se revisa el estado actual del tratamiento de la insuficiencia cardiaca (IC) y de la insuficiencia mitral (IM), y los fundamentos de la técnica de RVMP 2024-12-01T00:00:00Z