http://hdl.handle.net/10366/122452 Sun, 26 Apr 2026 11:21:16 GMT 2026-04-26T11:21:16Z http://hdl.handle.net/10366/166545 [ES] Los partos prematuros continúan siendo un problema de salud público, siendo la prematuridad una de las principales causas de mortalidad infantil. Esta tasa de prematuridad ha aumentado en los últimos años, y aunque la mayoría de esos partos suelen ser espontáneos, los partos prematuros provocados de forma iatrogénica para evitar posibles complicaciones como la preeclamsia o la diabetes gestacional están en aumento. Afortunadamente, los avances en cuidado neonatal han aumentado las tasas de supervivencia de esta población. La inmadurez del cerebro que presentan los bebés prematuros hace que sea más vulnerable al desarrollo de lesiones, entre las cuales se presentan los déficits neurológicos. El riesgo de presentar un efecto adverso neonatal se estima en 7 veces mayor en prematuros que en bebés nacidos a término. Dentro de los posibles efectos adversos existen múltiples complicaciones a corto y largo plazo, pudiendo experimentar consecuencias cognitivas y motoras e incluso una alteración de su rendimiento académico, con coeficientes intelectuales más bajos que los bebés nacidos a término. A todo esto, se añade un mayor riesgo de ingresos hospitalarios y déficit neurológicos junto con el gasto social y económico que supone. Para realizar una valoración y medición objetiva de estos efectos existen varias técnicas de imagen entre los que se encuentran la electroencefalografía (EEG) y la espectroscopía cercana al infrarrojo (NIRS). La EEG va a medir la actividad eléctrica cerebral, lo cuál va a representar la función cerebral, mientras que la espectroscopía cercana al infrarrojo mide la oxigenación cerebral o la demanda metabólica del cerebro. Estas tecnologías han demostrado ser factibles, no invasivas y beneficiosas. La importancia de la medición de ambos parámetros radica en la relación que presentan, cambios en la oxigenación preceden a cambios en la EEG. Además, la demanda metabólica cerebral y el suministro de oxígeno pueden verse interrumpidos en patologías o ser un indicador de ellas. Cada vez son más los autores que indican la necesidad de tratamientos de rehabilitación temprana para tratar de disminuir o incluso eliminar estas posibles complicaciones que experimentan los bebés prematuros. La Terapia de Locomoción Refleja o Método Vojta basada en el concepto de ontogénesis humana, es una técnica no invasiva cuyo objetivo consiste en desencadenar reacciones motoras innatas a través de estímulos táctiles y propioceptivos específicos en determinadas localizaciones y posturas; por otro lado, el masaje ha demostrado tener un efecto en la maduración cerebral. Debido a esto, el objetivo del presente estudio ha sido comprobar los efectos que la Terapia de locomoción refleja y el masaje producen de forma inmediata y a corto plazo en bebés prematuros y no prematuros con relación a la actividad eléctrica y oxigenación cerebral para determinar diferencias, similitudes y opciones de tratamiento para mejorar el desarrollo cerebral en bebés prematuros. Se ha demostrado la existencia de diferentes patrones de activación en función del estímulo aplicado, de este modo los estímulos acústicos representan un aumento de la actividad cortical a nivel de la región frontal mientras que los estímulos táctiles generan un aumento de dicha actividad a nivel del hemisferio izquierdo. El masaje ha demostrado conseguir un aumento de la actividad eléctrica cerebral más pronunciado a nivel del hemisferio cerebral izquierdo mientras que la Terapia de locomoción refleja aumentó la actividad eléctrica cerebral de forma bilateral, siendo más evidente en el hemisferio izquierdo. Ambas técnicas han demostrado generar un aumento de la actividad cortical, mientras que la Terapia de locomoción refleja consigue un aumento mayor en menor tiempo, el efecto no se mantiene al finalizar la intervención, por el contrario, el masaje consigue una menor activación que perdura y se mantiene incluso al finalizar la intervención. Con relación al sexo, mientras que la EEG mostró el mismo patrón de activación cerebral, para la oxigenación cerebral sólo existe similitud entre sexos en el segundo minuto de intervención, mostrando patrones invertidos el resto de tiempo. Se precisan más estudios que evalúen la actividad eléctrica cerebral y la oxigenación para poder establecer protocolos de tratamientos efectivos en esta población.; [EN] Preterm birth continues to be a public health problem, with prematurity being one of the leading causes of infant mortality. This rate of prematurity has increased in recent years, and although most of these deliveries are usually spontaneous, iatrogenically induced preterm deliveries to avoid potential complications such as preeclampsia or gestational diabetes are on the rise. Fortunately, advances in neonatal care have increased survival rates in this population. The immaturity of the brain in premature infants makes them more vulnerable to the development of injuries, including neurological deficits. The risk of presenting a neonatal adverse effect is estimated to be 7 times higher in premature infants than in full-term infants. Among the possible adverse effects there are multiple short- and long-term complications, and they may experience cognitive and motor consequences and even an alteration in their academic performance, with lower IQs than full-term babies. In addition to all this, there is a higher risk of hospital admissions and neurological deficits, together with the social and economic costs involved. For an objective assessment and measurement of these effects there are several imaging techniques including electroencephalography (EEG) and near-infrared spectroscopy. EEG will measure brain electrical activity, which will represent brain function, while near-infrared spectroscopy (NIRS) measures brain oxygenation or brain metabolic demand. These technologies have proven to be feasible, non-invasive and beneficial. The importance of measuring both parameters lies in the relationship they present; changes in oxygenation precede changes in EEG. In addition, cerebral metabolic demand and oxygen supply may be disrupted in pathologies or be an indicator of them. A growing number of authors indicate the need for early rehabilitation treatments to try to decrease or even eliminate these potential complications experienced by premature infants. The Reflex Locomotion Therapy or Vojta Method, based on the concept of human ontogenesis, is a non-invasive technique whose objective is to trigger innate motor reactions through specific tactile and proprioceptive stimuli in certain locations and postures; on the other hand, massage has been shown to influence brain maturation. Because of this, the aims of the present study were to test the immediate and short-term effects of Vojta therapy and massage in premature and non-preterm infants in relation to electrical activity and cerebral oxygenation to determine differences, similarities and treatment options to improve brain development in premature infants. Different activation patterns have been shown to exist depending on the stimulus applied, with acoustic stimuli representing an increase in cortical activity at the level of the frontal region, while tactile stimuli generate an increase in this activity at the level of the left hemisphere. Massage has been shown to achieve a more pronounced increase in brain electrical activity at the level of the left cerebral hemisphere while Reflex Locomotion Therapy increased brain electrical activity bilaterally, being more evident in the left hemisphere. Both techniques have been shown to generate an increase in cortical activity, while reflex locomotion therapy achieves a greater increase in less time, the effect is not maintained at the end of the intervention, while massage achieves a lower activation that lasts and is maintained even at the end of the intervention. In relation to sex, while EEG showed the same pattern of brain activation, for cerebral oxygenation there is only similarity between sexes in the second minute of the intervention, showing inverted patterns for the rest of the time. Further studies evaluating brain electrical activity and oxygenation are needed to establish effective treatment protocols in this population. Wed, 01 Jan 2025 00:00:00 GMT http://hdl.handle.net/10366/166545 2025-01-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/164935 [ES]Se lleva a cabo un ensayo clínico aleatorizado, comparativo, simple ciego y prospectivo, con una duración de 1 año y medio, con la finalidad de observar la efectividad de la aplicación de punción seca en el punto gatillo miofascial del músculo gastrocnemio frente a la aplicación de electrolisis percutánea ecoguiada en el tendón de Aquiles, a coro y a medio plazo, en pacientes con tendinopatía de Aquiles. Se lleva a cabo 5 momentos de evaluación, en el momento previo a la intervención (pre-interevención), a la semana de la intervención (S1), a la semana de la segunda intervención (S2), a la semana de la tercera intervención (S3) y a la semana de la cuarta intervención (S4). Las variables de estudio son la intensidad del dolor, medida mediante la escala visual analógica, el umbral del dolor a la presión, mediante una algometría, el rango de movimiento de flexión dorsal tobillo en carga medido mediante una goniometría a través de un dispositivo móvil, la calidad de vida mediante la escala VISA-A y la funcionalidad de tobillo y pie, mediante la escala FAAM. Tras analizar los resultados obtenidos durante las evaluaciones se concluye que la electrolisis percutánea es más efectiva que la punción seca para el tratamiento de la tendinopatía de Aquiles, a corto y a medio plazo, para manejar el dolor, aumentar el umbral del dolor a la presión, aumentar el rango de flexión dorsal de tobillo, mejorar la calidad de vida y la funcionalidad de tobillo y pie. Sat, 01 Mar 2025 00:00:00 GMT http://hdl.handle.net/10366/164935 2025-03-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/163782 [ES]La dormición es la incapacidad de semillas viables para germinar en condiciones favorables. Ventajas: Supervivencia de la planta y adaptación a cambios ambientales. Desventajas en agricultura: Variación en el tiempo de germinación. Reguladores clave: Ácido abscísico (ABA) y DOG1, que afectan la dormición. El óxido nítrico (NO) promueve la germinación y contrarresta el ABA. Se estudia la interacción entre NO y DOG1 para entender la regulación de la dormición. Sun, 01 Dec 2024 00:00:00 GMT http://hdl.handle.net/10366/163782 2024-12-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/163745 [EN]Tubulin is a key protein in eukaryotic cells, participating in numerous processes as the fundamental units of microtubules, and its proper functioning is linked to the cell's fate. The search for new agents that can inhibit the activity of this protein in tumor cells or harmful organisms is essential. There are many drug-binding sites in the protein that alter its polymerization into microtubules, and some clinically used drugs target these sites, such as taxol© and colchicine, the latter lending its name to the binding site targeted by our compounds. In this thesis, we have designed, synthesized, isolated, characterized, and evaluated more than 230 tubulin inhibitors with potential antitumor and/or antiparasitic activity by binding to the colchicine site oftubulin. The compounds were designed based on known structures, such as CA4 (a well-known ligand of the colchicine site), or antiparasitic compounds discovered by the research group, and through the use of computational technologies aimed at identifying more potent compounds that interact better with the target protein. This approach combines both rational drug design and experimental validation to identify new tubulin inhibitors with enhanced therapeutic potential. The compounds have been classified into two major families. The first consists of CA-4 analogs, which are further divided into two groups depending on the bridge connecting both rings: sulfonamides and tetrazoles. The structure of CA-4 consists of two rings connected by an olefinic bridge. Modifications have been introduced in these three elements, allowing us to gain extensive knowledge of the structure-activity relationship of these derivatives. The compounds in this family were designed to have intrinsic fluorescence, aiding the study of the compounds themselves without the need for adding external fluorophores. The second family comprises amide compounds, focused on their use as antiparasitics, designed based on computer models and comparisons between parasite and mammalian sequences, with the aim of exploiting differences between them to achieve selectivity. The synthesized compounds were evaluated in vitro against a broad panel of tumor cell lines to assess their antitumor activity and against four parasites: Strongyloides spp., Trichinella spp., Schistosoma spp., and Leishmania spp. Studies on their mechanism of action have been conducted to understand how they interact with their biological target. These studies included cell cycle analysis, apoptosis assays, confocal microscopy, studies on cell migration, and inhibition of tubulin polymerization. The studies on tumor cells showed that the CA-4 analog compounds exhibited antiproliferative effects, in the best cases at a near-nanomolar range, causing apoptosis in the cells and disrupting the structure of their microtubules. Since the emergence of resistance is also one of the causes of therapeutic failure, it was studied and confirmed that these compounds are not substrates of MDR pumps, which are associated with resistance processes. Finally, it was demonstrated in vitro that these compounds were capable of inhibiting tubulin polymerization. On the other hand, molecules with interesting antiparasitic effects, especially against Strongyloides venezuelensis and Trichinella spiralis, have been reported, with some even tested in in vivo models of parasitosis. Since parasite tubulin is much less known, during this thesis work, experi ments were conducted to obtain the functional protein from the four studied parasites for further study and characterization. Sun, 01 Dec 2024 00:00:00 GMT http://hdl.handle.net/10366/163745 2024-12-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/163717 [ES]En múltiples enfermedades, tanto en episodios agudos como en su cronificación, se ha observado una disfunción de la respuesta inmune (tanto a nivel celular como humoral). Entre estas patologías se encuentran COVID-19 y Leucemia Linfocítica Crónica (LLC). En ambos casos, se ha descrito cómo la disfunción de la respuesta inmune está relacionada con la dinámica de la respuesta humoral que, a su vez, se asocia con la evolución y el progreso de la enfermedad. En este sentido, diversos mecanismos pueden determinar la disfunción de la respuesta inmune como (1.) el reconocimiento, procesamiento y presentación antigénica, (2.) la regulación de la señalización intracelular, (3.) el microambiente celular mediante inmunosupresión y/o agotamiento celular. En su conjunto, se produce una disfunción de la respuesta humoral asociada a una progresión más rápida y agresiva de estas patologías. La caracterización de estos mecanismos subyacentes es una fuente muy valiosa para la determinación de biomarcadores de utilidad en el diagnóstico, pronóstico y evolución de la enfermedad. Asimismo, estos biomarcadores de disfunción inmune pueden tener potencial relevancia en la estratificación y el tratamiento de los pacientes. En esta Tesis Doctoral, se ha realizado una caracterización sistemática de la respuesta humoral mediante metodologías avanzadas de Proteómica Clínica (basadas en microarrays y en espectrometría de masas). Se han estudiado perfiles inflamatorios (mediante un panel de reactantes de fase aguda), presencia de autoanticuerpos, perfiles serológicos (IgM e IgG) frente a microorganismos más prevalentes y perfiles proteómicos diferenciales de células B para evaluar la señalización intracelular. Todo ello, permite evaluar las alteraciones en la respuesta humoral tanto en pacientes con COVID-19 como en pacientes con LLC, en distintos estadios de la enfermedad. Los resultados describen perfiles proteicos significativamente diferenciales de acuerdo a la gravedad y a la evolución en ambas enfermedades. En resumen, la caracterización proteómica, sistemática y exhaustiva de la respuesta humoral ha permitido establecer un panel de potenciales biomarcadores proteicos de interés tanto para el diagnóstico y pronóstico como para la estratificación de grupos de pacientes y su seguimiento clínico. Sun, 01 Dec 2024 00:00:00 GMT http://hdl.handle.net/10366/163717 2024-12-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/163651 [EN]VAV1 is a RHO guanine nucleotide exchange factor (GEF) predominantly expressed in hematopoietic cells, where it activates RHO GTPases —primarily RAC1—and plays essential roles in T cell development, immune response and cell signaling. Recent studies have elucidated VAV1’s involvement in various immune system pathologies and cancers, underscoring its therapeutic potential. Understanding the structure-activity relationship of VAV1 concerning its GEF-dependent and GEF-independent functions provides a foundation for developing specific VAV1 GEF inhibitors. In this thesis, we employed different drug design strategies to identify specific inhibitors of VAV1 GEF activity. We identified two pockets of interest within key regulatory domains of the protein that enabled to perform a virtual ligand screening of millions of compounds. From the hits obtained in this screening, we created a library of compounds designed based on two promising hits, introducing chemical modifications to improve initial VAV1 GEF inhibition. The activity of these compounds, asserted through VAV1—RAC1 nucleotide exchange assays, showed significant improvement following various chemical modifications. Further characterization of lead compounds was performed using biochemical and cellular assays to assess their specificity for VAV1 GEF inhibition. Additional strategies in this project included the design and synthesis of a stapled peptide targeting VAV1, as well as high-throughput screening of two large compound libraries. Overall, this thesis presents a comprehensive exploration of strategies for identifying and validating VAV1 GEF inhibitors, revealing promising candidates for further investigation Sun, 01 Dec 2024 00:00:00 GMT http://hdl.handle.net/10366/163651 2024-12-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/163626 [ES]El dolor crónico es una enfermedad compleja e incapacitante con un impacto muy significativo a nivel personal, social y económico. En los países occidentales, una de las principales causas de dolor crónico es la osteoartritis (OA), una enfermedad degenerativa de las articulaciones. El factor de crecimiento nervioso (NGF) y su receptor, TrkA, son objetivos clave en el estudio de los mecanismos del dolor, ya que juegan un papel central en el desarrollo y plasticidad de los nociceptores. Aunque los anticuerpos bloqueantes de NGF son eficaces en la reducción del dolor osteoartrítico, también causan graves efectos secundarios. Por tanto, comprender los mecanismos mediante los cuales el eje NGF/TrkA contribuye al dolor osteoartrítico sigue siendo prioritario. La ubiquitinación es un mecanismo fundamental para la regulación del eje NGF/TrkA. TrkA es ubiquitinado tras su activación por NGF, lo que dirige su internalización, tráfico intracelular y degradación. Investigaciones previas en nuestro laboratorio han caracterizado la mutación P782S de TrkA, que impide la unión de la E3 ubiquitina ligasa Nedd4l al receptor. Esto redunda en la sobreactivación del eje NGF/TrkA, así como a una hipersensibilidad al dolor térmico e inflamatorio, especialmente frente a estímulos mecánicos en un modelo experimental de OA. La activación de TrkA provoca cambios en la expresión génica que contribuyen al dolor crónico de la OA. Sin embargo, los estudios transcriptómicos en los ganglios raquídeos son escasos, y esta investigación es la primera en centrarse en los cambios de expresión génica mediados por NGF/TrkA utilizando un modelo de ganancia de función de TrkA. Al inducir OA en la rodilla de ratones silvestres y mutantes TrkA P782S, exploramos los cambios transcriptómicos mediados específicamente por TrkA durante la progresión de la OA. Nuestro objetivo principal fue identificar genes y vías reguladas directamente por el eje NGF/TrkA en el contexto de la OA, que contribuyan a los mecanismos reguladores de la señalización NGF/TrkA en la nocicepción y el procesamiento del dolor. El análisis transcriptómico de los ganglios de la raíz dorsal (DRG) L3-L5 ha revelado numerosos genes y rutas celulares previamente asociados con el dolor y la OA, los cuales ahora se confirman como regulados por el eje NGF/TrkA en este contexto; además, encontramos que genes diferencialmente expresados y rutas celulares previamente asociadas a la señalización NGF/TrkA se alteran durante la progresión de la OA. Estos incluyen reguladores transcripcionales como TP53 y los heterotrímeros SMAD2, 3 y 4, además de cascadas de señalización mediadas por receptores tirosina-kinasa y la familia MAPK. También destacamos nuevos posibles objetivos para la investigación del dolor en la OA, como Aak1, Kalrn y Kidins220, ampliamente estudiados en otros contextos de dolor, pero aun inexplorados en la OA. Entre estos genes diferencialmente expresados, identificamos también a Ndfip2, un adaptador y modulador de la familia Nedd4 de E3 ubiquitina ligasas, como un gen cuya expresión está controlada por el eje NGF/TrkA en condiciones de dolor. Hemos profundizado en sus funciones reguladoras del eje NGF/TrkA y en la nocicepción como segundo objetivo principal de este proyecto. Nuestros experimentos han confirmado su localización subcelular en el retículo endoplásmico y vesículas derivadas del complejo de Golgi en neuronas sensoriales. Hemos demostrado que Ndfip2 interacciona selectivamente con TrkA en neuronas de ganglios raquídeos, pero no con Nedd4l. Usando estrategias genéticas para modular la expresión de Ndfip2, hemos demostrado que regula los niveles de TrkA en su ruta biosintética, controlando su glicosilación, niveles en membrana y activación, pero no la ubiquitinación mediada por NGF. Este efecto es más pronunciado en ratones macho. En ratones knockout condicional de Ndfip2 en células que expresan TrkA hemos observado que Ndfip2 es crucial para la nocicepción mecánica y al frío, pero no afecta las respuestas al dolor térmico o inflamatorio. Además, Ndfip2 modula las diferencias sexuales en la respuesta a estímulos nociceptivos, aumentando el dimorfismo sexual en el dolor inducido por frío y formalina, pero disminuyéndolo en la nocicepción térmica y mecánica. Este fenotipo puede explicarse por el hecho de que Ndfip2 interactúa con y regula los canales iónicos TRPM8 y Piezo2, que son esenciales para la percepción del frío y mecánica, respectivamente. En conclusión, este estudio ha identificado varios genes y rutas involucrados en el dolor de la OA que son regulados por el eje NGF/TrkA. Entre ellos, Ndfip2 emerge como un modulador clave de los receptores de membrana relevantes para la nocicepción. En conjunto, estos hallazgos contribuyen a la comprensión de la regulación del eje NGF/TrkA, proporcionando valiosos conocimientos para futuras investigaciones en el campo del dolor; [EN]Chronic pain is a complex and debilitating condition with a significant personal, social and economic impact. In western countries, one of the major causes is osteoarthritis (OA), a degenerative joint disease. Nerve growth factor (NGF) and its receptor, TrkA, are key targets in the study of pain mechanisms, as they play a central role in the development and plasticity of nociceptors. Although NGF blocking antibodies have shown efficacy in reducing OA pain, they cause severe side effects. Therefore, understanding the mechanisms by which the NGF/TrkA axis contributes to osteoarthritic pain remains a critical research priority. Ubiquitination is a primary regulatory mechanism of the NGF/TrkA axis. TrkA undergoes ubiquitination upon NGF activation, which directs its internalisation, cellular trafficking and degradation. Previous research in our laboratory has characterised the P782S mutation of TrkA, which disrupts the binding of the E3 ubiquitin ligase Nedd4l to the receptor. This mutation leads to an overactivated NGF/TrkA axis and hypersensitivity to heat and inflammatory pain, and, in particular, to mechanical stimulation in an experimental model of osteoarthritis. TrkA activation leads to gene expression changes that contribute to chronic OA pain. However, transcriptomic studies in sensory ganglia are scarce and this research is the first to focus on F/TrkAmediated transcriptomic changes using a TrkA gain-of-function model. By inducing knee OA in wild-type and TrkA P782S mutant mice, we explored gene expression changes specifically mediated by TrkA during OA progression. Our primary goal was to identify genes and pathways that are directly regulated by the NGF/TrkA axis in the context of OA that contribute to the regulatory mechanisms of NGF/TrkA signalling in nociception and pain processing. Transcriptomic analysis of L3-L5 dorsal root ganglia (DRG) has revealed numerous genes and pathways previously associated with pain and OA which are now confirmed to be regulated by the NGF/TrkA axis in this context; moreover, DEGs and pathways previously associated with NGF/TrkA signalling that we have found to be altered in OA. These include transcriptional regulators such as TP53 and SMAD2, 3 and 4 heterotrimers, and signalling cascades mediated by receptor tyrosine kinases and the MAPK family. We also highlight new potential targets for OA pain research, such as Aak1, Kalrn and Kidins220, which are known in other pain contexts but remain unexplored in OA. Among these DEGs, we also identified Ndfip2, an adaptor and modulator of the Nedd4 family of E3 ubiquitin ligases, as a gene whose expression is controlled by the NGF/TrkA axis under pain conditions. We have performed further investigation due to its potential regulatory role as a second main goal of this project. Our experiments have confirmed its subcellular localisation in the endoplasmic reticulum and Golgi-derived vesicles also in sensory neurons. We have shown that Ndfip2 selectively interacts with TrkA in dorsal root ganglia neurons, but not with Nedd4l. Using genetic strategies to modulate Ndfip2 expression, we have shown that it regulates TrkA levels within its biosynthetic pathway, influencing receptor glycosylation, membrane levels and activation, rather than NGF-mediated ubiquitination. This effect is more pronounced in male mice. Conditional knockout of Ndfip2 in TrkA-expressing neurons in male and female mice has shown that Ndfip2 is critical for mechanical and cold nociception, but does not affect responses to heat or inflammatory pain. Furthermore, Ndfip2 modulates sex differences in response to nociceptive stimuli, increasing sexual dimorphism in cold and formalin-induced pain, but decreasing it in heat and mechanical nociception. This phenotype may be explained by our findings that Ndfip2 interacts with and regulates TRPM8 and Piezo2 ion channels, which are essential for cold and mechanical sensation respectively. In conclusion, our study has identified several genes and pathways involved in OA pain that are regulated by the NGF/TrkA axis. Among them, Ndfip2 emerges as a key modulator of membrane receptors relevant to nociception. Taken together, these findings pave the way for the understanding of NGF/TrkA signalling regulation, providing valuable insights that may contribute to future pain research. Sun, 01 Dec 2024 00:00:00 GMT http://hdl.handle.net/10366/163626 2024-12-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/161233 [SPA] Señalización celular se define como el proceso en el que las células interactúan con su entorno respondiendo a los diferentes estímulos que reciben del exterior generando respuestas frente a estos. Su descubrimiento se remonta al año 1855 de la mano de Claude Bernard cuando describió cómo las secreciones de glándulas carentes de ductos se liberaban al torrente sanguíneo y parecían ejercer cierto efecto sobre células distantes [1]. Esta recepción y respuesta a estímulos por parte de las células se da gracias a moléculas que se encuentran en la membrana celular y a complejas redes de señalización internas que conectan generalmente receptores de membrana con diversos sustratos intracelulares. De entre las vías de señalización más estudiadas en humanos destacan la vía de PI3K/Akt (phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B (AKT)) y las vías de MAPKs (Mitogen-Activated Protein Kinase). En esta sección nos enfocaremos en las vías de MAPK Mon, 01 Jan 2024 00:00:00 GMT http://hdl.handle.net/10366/161233 2024-01-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/161178 [ENG]Cells are constantly exposed to different endogenous and exogenous agents that can produce lesions in the gene7c material. Within all the types of DNA damage, double-strand breaks are the most damaging type of injury to the cell. In response to this damage, cells have developed a set of processes collec7vely known as the DNA Damage Response (DDR). One of the ini7al steps in homologous recombina7on (HR) is DNA-end resec7on. It involves the degrada7on of one DNA strand on both sides of the DSB in the 5'-3’ sense, genera7ng single-stranded DNA (ssDNA). Subsequently, different proteins bind to this ssDNA forming a protofilament capable of searching for homology and invading the template strand. While many proteins involved in these processes are regulated through phosphoryla7on by protein kinases, litle is known about the role of protein phosphatases in these mechanisms. The role of cyclin-dependent kinase (CDK) in regula7ng numerous mechanisms in response to DNA damage has been extensively studied. Since Cdc14 is the only known phosphatase that antagonizes Cdk, it is reasonable to think that its func7on is also crucial in regula7ng these processes. Thus, the absence of Cdc14 ac7vity lead s to excessive resec7on and genomic instability, sugges7ng a potencial role for the phosphatase in nega7vely regula7ng this process to temporally restrain resec7on progression and ensure an accurate DNA repair via homologous recombina7on. Addi7onally, high-throughput sequencing analyses have allowed for the inves7ga7on of various aspects of DNA repair at the nucleo7de level, including the extent of resec7on, its direc7onality, and the gene conversion events generated during lesion repair. Interes7ngly, the removal of Dna2 ac7vity or the disrup7on of its Cdk phosphoryla7on sites prevents the over-resec7on phenotype observed in the absence of the phosphatase, sugges7ng that Cdc14 nega7vely regulates resec7on by controlling the Sgs1/Dna2 complex. Curiously, only the mito7cally ac7vated Cdc14 (FEAR and MEN), but not DNA damage-dependent Cdc14 ac7va7on, dephopshorylates Dna2. Addi7onally, the dissolu7on of Dna2 foci, as observed by fluorescence microscopy, occurs exclusively during mitosis, sugges7ng that only mito7c ac7va7on of Cdc14 inhibits resec7on. In summary, these results demonstrate that the Cdk/Cdc14 module func7ons as a molecular switch that acts on the exonuclease Dna2 to regulate the proper extension of singlestranded DNA ends generated during resec7on, ensuring the accurate restora7on of the DNA molecule. Fri, 01 Nov 2024 00:00:00 GMT http://hdl.handle.net/10366/161178 2024-11-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/158113 [EN] The skin undergoes visible changes over time, reflecting the combined effects of intrinsic and extrinsic insults. Intrinsic ageing primarily results from natural physiological changes. Conversely, external factors, such as pollution, lifestyle habits, and exposure to ultraviolet radiation (UVR), play a significant role in extrinsic ageing. From all the insults, UVR is considered the primary contributor to skin ageing, accounting for 80% of its visible signs. Despite the highly effective barrier the skin layers provide, UVR can induce oxidative stress in human skin. When the load of reactive species in this organ is high, several pathways are activated, culminating in the degradation of extracellular matrix proteins such as collagen and elastin by the upregulation of metalloproteinases (MMPs) and other enzymes. Neutrophil elastase is considered one of the most destructive enzymes in this process due to its ability to degrade almost all extracellular matrix components by directly activating MMPs (pro- and active forms), facilitating their progression, and inactivating their activity regulators. The interplay of intrinsic and extrinsic factors shapes phenotypically distinct clinical manifestations. Chronological ageing leads to skin changes such as thinning, pallor, fine surface wrinkles, and reduced elasticity. In contrast, prolonged exposure to UVR results in more severe manifestations, including pronounced wrinkles, loss of elasticity, thickening, coarsening, dryness, telangiectasias, and uneven pigmentation. Hydrolysable tannins are recognised for their skin anti-ageing properties, particularly their strong antioxidant effects and their ability to inhibit elastolytic enzyme precursors. The genus Cytinus, described as one of the most enigmatic in the plant kingdom, has garnered attention for its potential as a source of bioactive compounds. While its properties were ascribed to its hydrolysable tannin content, the chemical composition of Cytinus hypocistis (L.) L. had not undergone thorough characterisation, and its active constituents remained undisclosed prior to the research conducted in the present thesis. Therefore, the primary objective of this work was to valorise the underexplored parasitic species Cytinus hypocistis (L.) L. subsp. macranthus Wettst by conducting its comprehensive characterisation, followed by a more detailed investigation of its skin anti-ageing properties. The chemical and bioactive characterisation (Chapter 3) was performed by analysing the nutritional and phytochemical profile of C. hypocistis and evaluating its bioactive properties. To the author's best knowledge, there are no studies on this edible plant's nutritional characterisation. The whole plant and its nectar revealed being nutritionally balanced, shedding light on its significance as famine food in the past. Its nectar proved to be a good source of protein and unsaturated fatty acids, approximately 2- fold higher than the whole plant. The phytochemical profile and bioactive properties of the whole plant, its petals, stalks, and nectar were also evaluated. Seventeen phenolic compounds were identified in all samples. Galloyl-bis-HHDP-glucose was the most abundant, with no significant difference in concentration between the petals and the whole plant. All extracts exhibited antidiabetic, antityrosinase, antibacterial, and cytotoxicity against four tested tumour cell lines, with no toxicity observed on a non-tumour cell line. The antioxidant capacity was the most prominent among the assessed activities, with no significant differences between the petals and the whole plant. The results from Chapter 3 suggested a relationship between phenolic compound concentration and C. hypocistis bioactive properties, rendering it necessary to investigate whether there is a phenolic compound exchange between the host and the parasite (Chapter 4). To the authors' best knowledge, this work was the first to compare the phenolic profile and bioactive properties of the parasite C. hypocistis and its host, Halimium lasianthum subsp. alyssoides (Lam.) Greuter. Except for one compound, trigalloyl-HHDP-glucoside, the phenolic profile of the host (both non-parasited and parasited) was different from that of the parasite, which possibly indicates the existence of a proper pathway of compound biosynthesis in the parasite. This hypothesis was supported by the PCA analysis, where three defined groups were identified: root extracts from H. lasianthum, aerial extracts from H. lasianthum, and C. hypocistis extracts. This work also highlighted the correlation between C. hypocistis hydrolysable tannin content and its antioxidant and anti-tyrosinase activities. C. hypocistis' biological properties were potentially correlated with its high content in hydrolysable tannins; thus, studying their extraction optimisation would give comprehensive clues for recovering these high-added-value bioactive compounds (Chapter 5). This work applied Response Surface Methodology to optimise tannin extraction using Heat-Assisted (HAE) and Ultrasound-Assisted (UAE) methods. Two three-factor Rotatable Central Composite Designs were used to assess the independent variables' linear, quadratic, and interactive effects on the target responses. The results from both extraction systems revealed high ethanol percentages as the critical factor in increasing tannin content, with UAE being selected as the best technique for the recovery. The skin anti-ageing properties of C. hypocistis optimal extracts from three distinct years were assessed, followed by a biochemometric approach to identify the discriminant metabolites associated with the most relevant properties (Chapter 6). Among the studied bioactivities, the anti-elastase results exhibited a significant variation among the samples from different years. A bioassay-guided fractionation was performed to identify the discriminant features responsible for this variation, followed by its purification and structural elucidation. Remarkably, one of the purified subfractions exhibited a tenfold improvement in neutrophil elastase inhibition efficacy compared to the crude extract; its effectiveness fell within the same range as SPCK, a potent irreversible elastase inhibitor. Overall, this subfraction also presented better antioxidant and enzyme inhibitory properties (collagenase and tyrosinase) than the crude extract and the positive controls, with no phototoxicity and cytotoxicity against different skin cell lines. Upon NMR structural clarification, this subfraction was elucidated as a galloyl glucose congener as indicated by characteristic spectral resonances of pedunculagin. However, the purified fraction seems to remain a mixture of isomers with differences in glucose, which might indicate that the anti-ageing compound found in C. hypocistis could be pedunculagin configurational isomers. The work developed in the present thesis comprehensively characterised the unexploited species C. hypocistis, offering insights into its use as famine food in the past and as a source of compounds with a broad spectrum of bioactive properties. Furthermore, it was possible to identify the compound class of utmost relevance for its bioactivities, validate its exclusive biosynthesis within the parasite, and maximise its recovery. Finally, C. hypocistis confirmed its potential as a source of anti-ageing compounds, revealing excellent antioxidant and enzyme-inhibitory properties, particularly its antineutrophil elastase activity. [ES] La piel experimenta cambios visibles con el tiempo, reflejando los efectos combinados de factores intrínsecos y extrínsecos. El envejecimiento intrínseco se debe principalmente a cambios fisiológicos naturales, mientras que la contaminación, hábitos de vida y la exposición a radiación ultravioleta (UVR) desempeñan un papel significativo en el envejecimiento extrínseco. De todas las agresiones que experimenta la piel, se considera que la UVR es la principal contribuyente a su envejecimiento, representando el 80% de sus signos visibles. A pesar de la barrera altamente efectiva que proporcionan las diferentes capas, la UVR puede inducir estrés oxidativo en la piel humana. Cuando la carga de especies reactivas en este órgano es alta, se activan varias vías que culminan en la degradación de proteínas de la matriz extracelular, como el colágeno y la elastina, mediante la sobreexpresión de metaloproteinasas (MMP) y otras enzimas. La elastasa de neutrófilos se considera una de las enzimas más destructivas en este proceso debido a su capacidad para degradar casi todos los componentes de la matriz extracelular mediante la activación directa de MMPs (formas proactivas y activas), facilitando su progresión e inactivando sus reguladores de actividad. La interacción de factores intrínsecos y extrínsecos da forma a manifestaciones clínicas fenotípicamente distintas. El envejecimiento cronológico conduce a cambios en la piel, como adelgazamiento, palidez, arrugas finas en la superficie y reducción de la elasticidad. En contraste, la exposición prolongada a la UVR resulta en manifestaciones más severas, que incluyen arrugas pronunciadas, pérdida de elasticidad, engrosamiento, rugosidad, sequedad, telangiectasias y pigmentación desigual. Los taninos hidrolizables son reconocidos por sus propiedades antienvejecimiento en la piel, especialmente por sus fuertes efectos antioxidantes y su capacidad para inhibir los precursores de enzimas elastolíticas. El género Cytinus (Cytinaceae), descrito como uno de los más enigmáticos en el reino vegetal, ha llamado la atención por su potencial como fuente de compuestos bioactivos. Aunque sus propiedades se atribuyeron a su contenido de taninos hidrolizables, la composición química de Cytinus hypocistis (L.) L. no había sido todavía caracterizada a fondo, y sus constituyentes activos permanecían sin revelar antes de la investigación realizada en la presente tesis. Por lo tanto, el objetivo principal de este trabajo ha sido el de valorizar la especie parasitaria poco explorada Cytinus hypocistis (L.) L. subsp. macranthus Wettst mediante una caracterización química integral, seguida de una investigación más detallada de sus propiedades antienvejecimiento en la piel. La caracterización química y bioactiva (Capítulo 3) fue realizada a través del análisis del perfil nutricional y fitoquímico de C. hypocistis, así como con la evaluación de sus propiedades bioactivas. Hasta donde el autor sabe, este es el primer trabajo que estudia la caracterización nutricional de esta planta comestible. Toda la planta y su néctar demostraron ser equilibrados desde el punto de vista nutricional, arrojando luz sobre su importancia como alimento en tiempos de hambruna en el pasado. Se demostró que su néctar es una buena fuente de proteínas y ácidos grasos insaturados, aproximadamente el doble que toda la planta. También se evaluó el perfil fitoquímico y las propiedades bioactivas de toda la planta, sus pétalos, tallos y néctar. Se identificaron diecisiete compuestos fenólicos en todas las muestras. El galato-bis-HHDP-glucosa fue el más abundante, sin mostrar una diferencia significativa de concentración entre los pétalos y toda la planta. Todos los extractos mostraron actividad antidiabética, anti-tirosinasa, antibacteriana y citotoxicidad frente a las cuatro líneas celulares tumorales ensayadas sin observar toxicidad en una línea celular no tumoral. La capacidad antioxidante fue la más destacada entre las actividades evaluadas, también sin diferencias significativas entre los pétalos y toda la planta. Los resultados del Capítulo 3 sugirieron una relación entre la concentración de compuestos fenólicos y las propiedades bioactivas de C. hypocistis, haciendo necesario investigar si hay un intercambio de compuestos fenólicos entre el huésped y la planta parásita (Capítulo 4). Según el conocimiento de los autores, este trabajo también fue el primero en comparar el perfil fenólico y las propiedades bioactivas del parásito C. hypocistis y su huésped, Halimium lasianthum subsp. alyssoides (Lam.) Greuter (Cistaceae). Excepto por un compuesto, el trigaloyl-HHDP-glucósido, el perfil fenólico del huésped (tanto no parasitado como parasitado) fue diferente al del parásito, lo que posiblemente indica la existencia de una vía adecuada de biosíntesis de compuestos en el parásito. Esta hipótesis fue respaldada por el análisis de PCA, donde se identificaron tres grupos definidos: extractos de raíces de H. lasianthum, extractos aéreos de H. lasianthum y extractos de C. hypocistis. Este trabajo también destacó la correlación entre el contenido de taninos hidrolizables de C. hypocistis y sus actividades antioxidantes y anti-tirosinasa. Las propiedades biológicas de C. hypocistis estuvieron potencialmente correlacionadas con su alto contenido de taninos hidrolizables; por lo tanto, estudiar la optimización de su extracción proporcionaría pistas completas para recuperar estos compuestos bioactivos de alto valor añadido (Capítulo 5). Este trabajo aplicó la Metodología de Superficie de Respuesta para optimizar la extracción de taninos utilizando los métodos de Asistencia Térmica (HAE) y Asistencia Ultrasónica (UAE). Se aplicó un diseño compuesto central y rotativo para la optimización, que constaba de tres factores para evaluar los efectos lineales, cuadráticos e interactivos de las variables independientes en las respuestas objetivo. Los resultados de ambos sistemas de extracción revelaron altos porcentajes de etanol como el factor crítico para aumentar el contenido de taninos, y se seleccionó UAE como la mejor técnica para la recuperación de los mismos. Se evaluaron las propiedades antienvejecimiento en la piel de los extractos óptimos de muestras de C. hypocistis recogidas en tres años distintos, seguidas de un enfoque bioquimiométrico para identificar los metabolitos discriminantes asociados con las propiedades más relevantes (Capítulo 6). Entre las bioactividades estudiadas, los resultados anti-elastasa mostraron una variación significativa entre las muestras de diferentes años, por lo que se realizó un fraccionamiento guiado por ensayos biológicos para identificar las características discriminantes responsables de esta variación, seguido de la purificación y elucidación estructural del compuesto responsable. Notablemente, una de las subfracciones purificadas mostró una mejora diez veces mayor en la eficacia de inhibición de la elastasa de neutrófilos en comparación con el extracto crudo; su efectividad se encontró dentro del mismo rango que SPCK, un potente inhibidor irreversible de elastasa. En general, esta subfracción también presentó mejores propiedades antioxidantes e inhibidoras de enzimas (colagenasa y tirosinasa) que el extracto crudo sin mostrar fototoxicidad y citotoxicidad contra diferentes líneas celulares de la piel. Tras la validación estructural mediante RMN, esta subfracción se elucidó como un compuesto formado por una base de glucogalina, que muestra resonancias espectrales características similares a las de la pedunculagina. Sin embargo, la fracción purificada parece tener una mezcla de isómeros con diferencias en la glucosa, lo que podría indicar que el compuesto antienvejecimiento encontrado en C. hypocistis podrían ser isómeros configuracionales de la pedunculagina. El trabajo desarrollado en la presente tesis caracterizó de manera integral la especie poco explorada C. hypocistis, ofreciendo perspectivas sobre su uso como alimento en tiempos de hambruna en el pasado y como fuente de compuestos con un amplio espectro de propiedades bioactivas. Además, fue posible identificar la clase de compuestos de máxima relevancia para sus bioactividades, validar su biosíntesis exclusiva dentro del parásito y maximizar su recuperación. Finalmente, C. hypocistis confirmó su potencial como fuente de compuestos antienvejecimiento, revelando excelentes propiedades antioxidantes e inhibidoras de enzimas, especialmente su actividad anti-elastasa de neutrófilos. Wed, 01 Nov 2023 00:00:00 GMT http://hdl.handle.net/10366/158113 2023-11-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/158108 [ES] La familia de receptores tirosina quinasa ErbB/HER y sus ligandos juegan un papel fundamental en las vías de señalización implicadas en la proliferación, migración y diferenciación celular. Cambios en la expresión de estas proteínas se relacionan frecuentemente con la aparición de múltiples enfermedades oncológicas, y su uso como dianas terapéuticas ha demostrado mejorar la supervivencia de pacientes con distintos tipos de cáncer. A pesar de ello, el desarrollo de vías de escape y la adquisición de mecanismos de resistencia a las terapias actuales está siendo un grave problema para el tratamiento de estas patologías. Por ejemplo, el carcinoma renal de células claras o el adenocarcinoma ductal pancreático se caracterizan por su alta tasa de recaída después de una respuesta a corto plazo a las terapias dirigidas. En el cáncer de mama HER2+, la resistencia primaria o adquirida a las terapias anti-HER2 es responsable de la mayoría de fracasos al tratamiento. Por ello, estudiar los mecanismos celulares y moleculares subyacentes a cada patología es esencial para poder diseñar nuevas terapias dirigidas, que puedan ser eficientes para la cura de estas enfermedades. Teniendo en cuenta estos antecedentes, los objetivos de la presente Tesis Doctoral son: I. Evaluar el potencial antitumoral de nuevas terapias dirigidas contra el carcinoma renal de células claras y el adenocarcinoma ductal pancreático. II. Identificar nuevas dianas terapéuticas capaces de revertir la resistencia a neratinib en modelos de cáncer de mama HER2+. Wed, 01 Nov 2023 00:00:00 GMT http://hdl.handle.net/10366/158108 2023-11-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/157737 [ES] La presente tesis gira en torno al fenómeno de la disforia de voz, entendida desde la intersección de la identidad de género con el sexo asignado. La disforia de voz hace referencia al malestar que experimentan las personas —especialmente las personas trans— con sus voces, al no considerarlas acordes con su identidad de género, lo que va a tener un impacto negativo sobre su vida diaria. En tanto malestar, la disforia de voz presenta un componente subjetivo, relacionado con el estado afectivo-emocional, que se puede medir por medio de cuestionarios autoinformados como el Trans Woman Voice Questionnaire. Este cuestionario fue creado para mujeres trans, por lo que en el primer estudio de esta tesis lo hemos adaptado para aplicarlo a personas de todos los géneros, sin que esto haya afectado a sus propiedades psicométricas. En dicho estudio también hemos visto que la disforia de voz parece definirse por la presencia de síntomas ansioso-depresivos, por una actitud negativa hacia uno mismo y por la insatisfacción con la propia voz, por motivo de género. Asimismo, hemos querido explorar si la disforia de voz también incluía algún componente objetivo, relacionado con los propios parámetros del habla: esto es, ver si la disforia de voz estaba vinculada con, o se expresaba en, parámetros concretos de la voz. Para ello, en el segundo estudio, hemos realizado un análisis espectrográfico del habla, para ver si esta difería entre personas cis y trans con alta y baja disforia de voz. Así, hemos identificado algunos parámetros de perturbación de la intensidad, de ruido en la señal de la voz, de prosodia y, en menor medida, de frecuencia e intensidad, que podrían estar vinculados con el nivel disforia de voz. Finalmente, en el tercer estudio hemos manipulado la carga cognitiva mediante una tarea dual —consistente en hablar mientras se realiza una detección de señales— y hemos registrado las alteraciones que se han producido en la voz, como consecuencia del incremento de la carga cognitiva. Los parámetros que se vieron afectados estaban relacionados con la frecuencia fundamental, los formantes de frecuencia, la intensidad y su perturbación, la proporción de ruido en la voz y la prosodia. Comparando entre sí el segundo y tercer estudio, vimos que el perfil de voz de las personas trans se asemejaba al encontrado en la condición de carga cognitiva alta, y también era similar al de las personas con alta disforia de voz, en lo que respecta a los parámetros de frecuencia, intensidad y prosodia; si bien no se encontraron tales similitudes respecto de los parámetros de perturbación de la frecuencia y de ruido. Estos hallazgos parecen sugerir que la transexualidad podría estar asociada a una mayor carga cognitiva —por el monitoreo continuado de sus voces— y a mayores niveles de disforia de voz, si bien los resultados no son concluyentes a lo largo de todos los parámetros y se requiere una mayor exploración en el futuro. [EN] The present thesis revolves around the phenomenon of voice dysphoria, understood from the intersection of gender identity with sex assigned at birth. Voice dysphoria refers to the discomfort that people —especially trans people— experience with their voices, when considering them inconsistent with their gender identity, which will have a negative impact on their daily life. As voice dysphoria is perceived as discomfort, it presents a subjective component, related to the affective-emotional state, which can be measured through self-reported questionnaires such as the Trans Woman Voice Questionnaire. This questionnaire was created for trans women, so in the first study of this thesis we have adapted it in order to apply it to people of all genders, without this having affected its original psychometric properties. In that study we have also found that voice dysphoria seems to be defined by the presence of anxious-depressive symptoms, a negative attitude towards oneself and some dissatisfaction with one's own voice, due to gender. Likewise, we wanted to explore whether voice dysphoria also included an objective component, related to speech parameters: that is, to investigate if voice dysphoria was linked to, or expressed in, specific voice parameters. To do this, in the second study, we have carried out a spectrographic analysis of speech, to see if such parameters differed between cis and trans people with high and low voice dysphoria. Thus, we have identified some parameters about intensity disturbance, noise in the voice signal, prosody and, to a lesser extent, frequency and intensity, which could be linked to the level of voice dysphoria. Finally, in the third study we have manipulated cognitive load through a dual task —consisting of speaking while completing a signal detection task—and we have recorded the alterations that have occurred in the voice, as a consequence of the increase in cognitive load. The parameters that were affected in that case were related to fundamental frequency, frequency formants, intensity and its disturbance, noise in the voice signal and prosody. When comparing the second and third studies, we appreciated that the voice profile of trans people was similar to that found in the high cognitive load condition and was also similar to that of people with high voice dysphoria, with regard to the parameters of frequency, intensity and prosody, although no such similarities were found regarding the frequency disturbance and noise parameters. These findings seem to suggest that transsexuality could be associated with a greater cognitive load —due to the continuous monitoring of their voices— and higher levels of voice dysphoria. However, the results are not conclusive across all parameters and further investigation is required. Sun, 01 Jan 2023 00:00:00 GMT http://hdl.handle.net/10366/157737 2023-01-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/157592 [ES] En la actualidad, se desconoce la incidencia y las características de los pacientes que son diagnosticados con colangiocarcinoma (CCA) en el área de Salamanca que, además de esta provincia, incluye las provincias de Zamora y Ávila. El Complejo Asistencial Universitario de Salamanca (CAUSA) es el hospital de referencia para los pacientes con este tipo de tumor biliar que cumplen los criterios para ser sometidos a una resección quirúrgica. A nivel mundial, se estima que sólo un 20-25% de los pacientes con CCA se diagnostican en etapas iniciales, cuando aún pueden recibir un tratamiento quirúrgico potencialmente curativo. El hecho de que este tumor tenga una evolución silenciosa en las primeras etapas, junto con la falta de biomarcadores precisos para un diagnóstico precoz y que no estén bien identificados todos los factores de riesgo, justifica que el pronóstico de los pacientes con este cáncer biliar sea malo. En base a estos antecedentes se plantearon los siguientes objetivos de esta Tesis Doctoral: Objetivo 1º: Identificar los casos de pacientes con CCA atendidos en el CAUSA en el periodo 2015-2020, en comparación con otros tumores hepáticos. Objetivo 2º: Realizar un estudio descriptivo de las características de los pacientes con CCA que fueron candidatos a cirugía en el área de Salamanca en el periodo comprendido entre 2015 y 2020. Objetivo 3º: Realizar un estudio metabolómico en muestras de suero de pacientes con iCCA, HCC y sujetos control para identificar metabolitos con niveles alterados en iCCA y HCC con potencial utilidad para un diagnóstico temprano y para discriminar entre los dos tipos de tumores hepáticos. Sun, 01 Jan 2023 00:00:00 GMT http://hdl.handle.net/10366/157592 2023-01-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/157513 [ES] Nuestra hipótesis es que el proceso de cicatrización en ausencia de expresión de alguno de los genes causantes de la enfermedad (endoglina o ALK) generaría las condiciones necesarias para que los vasos sanguíneos formados puedan ser anómalos y equivalentes a malformaciones arteriovenosas. Por ello, realizar un modelo de heridas cutáneas en la espalda de ratones Eng-/- provocaría la formación de malformaciones arteriovenosas que podríamos detectar y medir tiñendo los vasos sanguíneos de la zona. Fri, 01 Sep 2023 00:00:00 GMT http://hdl.handle.net/10366/157513 2023-09-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/157498 [ES] El síndrome de fragilidad se asocia a un envejecimiento adverso y disminución de las reservas fisiológicas. La causa subyacente de la fragilidad es multifacética, la cual incluye la inmunosenescencia, inflamación, entre otras alteraciones, las cuales conducen a la discapacidad cognitiva, física y la muerte. Por lo tanto, el descubrimiento de biomarcadores proteicos puede ser un paso adelante para el diagnóstico y pronóstico de este síndrome. Actualmente, los biomarcadores en saliva se utilizan como predictores tempranos de enfermedades. La recolección de saliva no es invasiva y es simple, lo que constituye un factor primordial para realizar pruebas en la población frágil. Los objetivos principales de esta investigación fueron analizar indicadores cognitivos, físicos y funcionales del síndrome de fragilidad y explorar la determinación de perfiles proteicos en saliva para su posible evaluación y correlación con este síndrome en un estudio piloto realizado a un grupo de 34 adultos mayores no institucionalizados de la provincia de Salamanca. Para la evaluación de los marcadores cognitivos, físicos y funcionales se empleó un protocolo de escalas (tests), que evaluaron indicadores bio-conductuales y psicosociales, y para la detección de biomarcadores en los 68 analitos de saliva obtenidos, se utilizó el método proteómico de monitoreo de reacción múltiple (SRM), en donde se detectó un perfil proteico diferencial de 9 proteínas: CYTC, CYTD, CYTS, CYTB, MIF, ALBU, CD44, COX3 y B2MG. Se realizaron análisis multivariantes y multivariados para la obtención de los resultados. Las conclusiones alcanzadas fueron la vinculación existente de aspectos multifactoriales tanto biológicos, físicos, funcionales, cognitivos y sociales del adulto mayor con el síndrome de fragilidad. Así como la detección de un perfil proteico diferencial relacionado con respuesta inflamatoria persistente de bajo grado a morbilidades asociadas, como el envejecimiento vascular, la adiposidad, problemas del estado de ánimo, deterioro cognitivo global y frontal, alteraciones de la marcha, fuerza de presión manual y la actividad física. En futuras investigaciones se recomienda aumentar el tamaño de la muestra para poder obtener mayores resultados, así como perfeccionar la metodología para poder llegar a una verificación y validación de los potenciales biomarcadores ya mencionados. [EN] The frailty syndrome is associated with adverse aging and decreased physiological reserves. The underlying cause of frailty is multifaceted, which includes immunosenescence, inflammation, among other alterations, which lead to cognitive and physical disability, and death. Therefore, the discovery of protein biomarkers may be a step forward for the diagnosis and prognosis of this syndrome. Currently, biomarkers in saliva are used as early predictors of diseases. Saliva collection is non-invasive and simple, which is a primary factor for testing in the frail population. The main objectives of this research were to analyze cognitive, physical and functional indicators of frailty syndrome and to explore the determination of protein profiles in saliva for their possible evaluation and correlation with this syndrome in a pilot study carried out on a group of 34 non-institutionalized older adults from the province of Salamanca. For the evaluation of the cognitive, physical and functional markers, a wide compendium of scales (tests) was used that evaluated bio-behavioral and psychosocial indicators, and for the detection of biomarkers in the 68 saliva analytes obtained, the proteomic method of multiple reaction monitoring (SRM/MRM), where a differential protein profile of 9 proteins was detected: CYTC, CYTD, CYTS, CYTB, MIF, ALBU, CD44, COX3, and B2MG. Multivariate analysis were performed to obtain the results. The conclusions reached were the existing link of multifactorial biological, physical, functional, cognitive and social aspects of the elderly with the frailty syndrome. As well as the detection of a differential protein profile related to a persistent low-grade inflammatory response to associated morbidities, such as vascular aging, adiposity, mood problems, global and frontal cognitive impairment, gait disturbances, manual pressure force, and physical activity. In future research, it is recommended to increase the size of the sample in order to obtain better results, as well as to improve the methodology in order to achieve verification and validation of the already mentioned potential biomarkers. Sun, 01 Jan 2023 00:00:00 GMT http://hdl.handle.net/10366/157498 2023-01-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10366/156142 [EN]Introduction: The transition to an ageing population has brought several challenges to societies and healthcare systems around the world. The need for new healthcare approaches and interventions to adjust to the new situation is one of the most relevant issues worldwide. This project particularly targets three of these challenges: the complexity of older adult care, the increase of people living with dementia and their caregivers, and the poor accessibility of rural populations to access healthcare services to face these challenges. Aims: To develop a proof of concept of a technological platform integrating several innovative digital tools for health and wellness coaching of older adults with dementia and cognitive impairment and their carers, and to study the effects of utilisation of the platform on physical health, mental and emotional wellbeing, activities of daily living, social and cognitive functioning and professional care use. To involve older adults with dementia and their carers in the design and development of the platform, assessing their satisfaction, the impact of the system in realistic settings, acceptability and usability, to enable them to manage the system autonomously in daily life. Methodologies: Two systematic reviews were conducted in July 2021 and April 2023 in PubMed, CINAHL, and Web of Science. A qualitative appraisal/risk of bias was performed for the studies included. Three qualitative studies were conducted, implementing online and face-to-face workshops, semi-structured interviews, focus groups, and co-design and co-production processes with Patient and Public Involvement (PPI). Thematic analysis was the chosen approach for the analysis of the results. A mixed-methods usability and user experience study and a pilot study of an online training and support programme for caregivers of people living with dementia are being carried out, implementing semi-structured interviews and questionnaires targeting usability, dementia knowledge and caregiver burden. Results: A series of steps necessary to create the foundations of a technological platform were identified: a) the interRAI LTFC and the interRAI HC were recommended as the CGAs to be used for the assessment and monitoring of potential users in long-term care facilities and home care, respectively; b) the barriers for the usability and implementation of DHTs to assist and to help to reach the full potential of CGAs are described, as well as a series of recommendations to improve its usability and implementation by healthcare professionals and clinical settings; c) a framework to study the pros and cons of developing digital patient and public involvement and suggestions to improve the implementation of e-PPI were developed and identified; d) the facilitators and barriers to implementing the socio-community intervention of the Meeting Centre Support Programme were identified and several recommendations were described to overcome the limitations for a successful implementation; and e) as an attempt to offer a support service alternative for caregivers of PLwD in remote rural areas, the cultural adaptation of the iSupport training and support programme for carers of PLwD was developed, and its usability and user-experience, and impact on dementia knowledge and caregiver burden are under study. Conclusions: This project described a series of steps necessary to create the foundations of a technological platform for health and wellness coaching of older adults with dementia and cognitive impairment and their carers. By embedding the findings in this project and including novel technologies such as AI, robotics, wearable technologies, and monitoring devices, the idea of the technological platform could be feasible. Further projects could implement these initiatives to generate an impact on facing the current challenges of the ageing population. [ES]Introducción: La transición hacia una población que envejece ha planteado varios retos a las sociedades y los sistemas sanitarios de todo el mundo. La necesidad de nuevos enfoques e intervenciones sanitarias para adaptarse a la nueva situación es una de las cuestiones más relevantes en todo el mundo. Este proyecto se centra especialmente en tres de estos retos: la complejidad de la atención a los adultos mayores, el aumento del número de personas que viven con demencia y de sus cuidadores, y la escasa accesibilidad de las poblaciones rurales a los servicios sanitarios para hacer frente a estos retos. Objetivos: Desarrollar una prueba de concepto de una plataforma tecnológica que integre varias herramientas digitales innovadoras para la capacitación en salud y bienestar de adultos mayores con demencia y deterioro cognitivo y sus cuidadores, y estudiar los efectos de la utilización de la plataforma en la salud física, el bienestar mental y emocional, las actividades de la vida diaria, el funcionamiento social y cognitivo y el uso para los cuidados profesionales. Involucrar a los adultos mayores con demencia y a sus cuidadores en el diseño y desarrollo de la plataforma, evaluando su satisfacción, el impacto del sistema en entornos realistas, su aceptabilidad y usabilidad, para permitirles manejar el sistema de forma autónoma en la vida diaria. Métodos: Se realizaron dos revisiones sistemáticas en julio de 2021 y abril de 2023 en PubMed, CINAHL y Web of Science. Se realizó una valoración cualitativa/riesgo de sesgo de los estudios incluidos. Se realizaron tres estudios cualitativos, implementando talleres online y presenciales, entrevistas semiestructuradas, grupos focales y procesos de codiseño y coproducción con Participación de Pacientes y Público (PPI). El análisis temático fue el enfoque elegido para el análisis de los resultados. Se está llevando a cabo un estudio de usabilidad y experiencia de usuario con métodos mixtos y un estudio piloto de un programa en línea para la capacitación y formación de cuidadores de personas que viven con demencia, en los que se aplicarán entrevistas semiestructuradas y cuestionarios sobre usabilidad, conocimiento de la demencia y sobrecarga de los cuidadores. Resultados: Se identificaron una serie de pasos necesarios para crear las bases de una plataforma tecnológica: a) se recomendaron el interRAI LTFC y el interRAI HC como las Evaluaciones Geriátricas Integrales (EGI) que se utilizarán para la evaluación y el seguimiento de los usuarios potenciales en los centros de larga estancia y en la atención domiciliaria, respectivamente; b) se describen las barreras para la usabilidad y la implementación de las Tecnologías de Salud Digital (TSD) para asistir y ayudar a alcanzar todo el potencial de las EGI, así como una serie de recomendaciones para mejorar su usabilidad e implementación por parte de los profesionales sanitarios y los entornos clínicos; c) se desarrolló e identificó un marco para estudiar los pros y los contras del desarrollo de la participación digital de pacientes y público (e-PPI, por sus siglas en inglés) y sugerencias para mejorar la implementación de e-PPI; d) se identificaron los factores que facilitan y dificultan la aplicación de la intervención sociocomunitaria del Programa de Atención de Centros de Encuentro (MCSP, por sus siglas en inglés) y se describieron varias recomendaciones para superar las limitaciones y lograr una aplicación satisfactoria; y e) como intento de ofrecer una alternativa de servicio de apoyo a los cuidadores de personas que viven con demencia en zonas rurales remotas, se desarrolló la adaptación cultural del programa de formación y apoyo iSupport para cuidadores de personas que viven con demencia, y se está estudiando su usabilidad y experiencia de usuario, así como su impacto en los conocimientos sobre la demencia y la sobrecarga en los cuidadores. Conclusión: Este proyecto describe una serie de pasos necesarios para crear los cimientos de una plataforma tecnológica para la capacitación en salud y bienestar de los adultos mayores con demencia y deterioro cognitivo y sus cuidadores. La idea de la plataforma tecnológica podría ser factible si se incorporan los resultados de este proyecto y se incluyen tecnologías novedosas como la inteligencia artificial, la robótica, las tecnologías ponibles y los dispositivos de monitorización. Otros proyectos podrían poner en práctica estas iniciativas para generar un impacto a la hora de afrontar los retos actuales del envejecimiento de la población. Sun, 01 Jan 2023 00:00:00 GMT http://hdl.handle.net/10366/156142 2023-01-01T00:00:00Z