TFM. Máster en Neurociencias

Expresión de genes de la vía mTOR en neuronas con alteraciones patológicas de pacientes con epilepsia refractaria

Sat, 01 Jul 2023 00:00:00 GMT

[ES]Entre las causas de la epilepsia refractaria se encuentra la displasia cortical focal (DCF), una afectación del neurodesarrollo que se caracteriza por alteraciones a nivel celular y tisular, como la presencia de neuronas dismórficas, ectópicas, balonadas y gliosis; y a nivel molecular, la desregulación de distintos genes implicados en la vía mTOR. Este trabajo pretender ser una aproximación al estudio de la etiopatogenia de la epilepsia refractaria y su relación con la DCF, con el fin último de adentrarse en la búsqueda de nuevos biomarcadores para esta patología. Para ello, en primer lugar, el análisis histopatológico de muestras biopsiadas procedentes de pacientes diagnosticados con epilepsia refractaria compatible con DCF nos permitió identificar los fenotipos típicos de tejido epileptogénico. Estos hallazgos fueron compatibles con una DCF tipo IIA. A continuación, empleando un microdisector láser (ML), en cada caso estudiado (n=5) se aislaron individualmente dos grupos neuronales: con alteraciones morfológicas y sin ellas (control). Para cada muestra se llevó a cabo un análisis de expresión génica mediante la técnica RT-qPCR de 4 genes implicados en la vía mTOR. En este análisis se detectó la sobreexpresión del gen RHEB en las neuronas con alteraciones morfológicas frente a su control, pudiendo correlacionarse este resultado con la hiperactivación de mTOR reportada en las crisis epilépticas. Por el contrario, en estas células también se detectó sobreexpresión de PTEN, un represor de la vía mTOR. Para este caso postulamos que el paciente podría estar bajo algún tratamiento farmacológico. Se demuestra que las neuronas con alteraciones morfológicas e hipotético fenotipo epileptogénico que fueron seleccionadas por ML, muestran una expresión génica aberrante en alguno de los genes relacionados con la vía mTOR, pudiendo ser útiles para el diagnóstico y como potencial diana en el tratamiento de la epilepsia refractaria.; [EN]Among the causes of refractory epilepsy is focal cortical dysplasia (FCD), a neurodevelopmental disorder characterized by cellular and tissue alterations, such as the presence of dysmorphic, ectopic, balloon cells and gliosis; as well as molecular dysregulation of different genes involved in the mTOR pathway. We aim to provide an approach to the study of the etiopathogenesis of refractory epilepsy and its relationship with FCD, with the objective of searching for new biomarkers for this condition. For this purpose, histopathological analysis of biopsied samples from patients diagnosed with drug-resistant epilepsy compatible with FCD allowed us to identify typical phenotypes of epileptogenic tissue. These findings were consistent with FCD type IIA. Then, using a laser microdissector (LMD), in each case (n=5) two sets of cells were individually isolated: those with morphological abnormalities and control cells without morphological abnormalities. For each sample, a gene expression analysis was performed using RT-qPCR technique for 4 genes involved in the mTOR pathway. In this analysis, overexpression of the RHEB gene was detected in the population with morphological abnormalities compared to the control. This result can be correlated with the reported hyperactivation of mTOR in epileptic seizures. In contrast, overexpression of the PTEN, a repressor of the mTOR pathway, was also detected in these cells. For this case it was postulated that the patient could be under some pharmacological treatment. It is demonstrated that cells with morphological alterations and hypothetical epileptogenic phenotype which were selected by LM, show aberrant gene expression in some of the genes related to the mTOR pathway, and this may be useful for diagnosis and as a potential target treatment of refractory epilepsy.

Evaluación de un modelo bioquímico para cuantificar el dolor en vertebrados

Sun, 01 Jan 2017 00:00:00 GMT

[ES] El pez cebra (Danio rerio) es un modelo animal vertebrado utilizado en numerosos campos de investigación científica, entre ellos el del dolor. Hasta el momento no se dispone de una he-rramienta eficaz para cuantificar el dolor, por lo que es necesario continuar la búsqueda de métodos que permitan determinar de manera exacta el grado de dolor. En el presente trabajo se propone que los embriones de pez cebra de 72 horas post-fecundación (hpf) son una he-rramienta para la cuantificación de la sensación dolorosa. Para ello, los embriones de pez ce-bra se expusieron de manera aguda a los siguientes estímulos potencialmente dolorosos: tem-peratura elevada (39 ºC), pH bajo (5.75), capsaicina y kainato (en dosis 100 μM, 10 μM, y 1 μM). Posteriormente se han analizado los cambios en el comportamiento producidos por estos estímulos, y la expresión de cfos se ha cuantificado mediante Western Blot en embriones con-trol y aquellos expuestos a estímulos potencialmente dolorosos. De acuerdo con los resultados obtenidos, la exposición a kainato a una dosis 1 μM y la incubación a pH bajo (5.75) son las aproximaciones más prometedoras para generar una sobreexpresión de cfos como respuesta a la activación del sistema nociceptivo en embriones de pez cebra. Por tanto, hemos desarrolla-do una metodología válida para la determinación de cambios bioquímicos producidos por estímulos dolorosos. La realización de futuros experimentos de analgesia que completen este trabajo nos permitirá desarrollar este método como la primera herramienta capaz de cuantifi-car objetivamente el dolor en pez cebra. [EN] Zebrafish (Danio rerio) is recognized as non-mammalian vertebrate model organism which is used in many different fields of research, including pain research. Nowadays, there is no ef-fective tool to measure pain perception, so that it is necessary to find a novel approach to ac-curately determine the degree of pain. In this assay, we propose that zebrafish embryos of 72 hours post-fertilization (hpf) are an ideal tool to quantify pain. Zebrafish embryos were acute-ly exposed to the following potential noxious stimuli: high temperature (39 ºC), low pH (5.75), capsaicin and kainate (at doses 100 μM, 10 μM, and 1 μM). We have analysed the behavioural responses elicited by these stimuli, and the expression of cfos was assessed by Western Blot in control and treated embryos. Our results indicate that exposure to 1 μM kainate and incubation at low pH (5.75) are the most promising approaches to induce the up-regulation of cfos as a response to the activation of the nociceptive system in zebrafish em-bryos. Thus, we have developed a valid methodology to determine the biochemical changes induced by noxious stimuli. Future directions will include analgesic assays that complete this work, and it will allow us to develop this method as the first tool to objectively evaluate pain in zebrafish.

Expresión diferencial del GASH/Sal tras estimulación sonora

Mon, 01 Jan 2018 00:00:00 GMT

[ES] La línea de hámster dorado o sirio (Mesocricetus Auratus) GASH/Sal es un modelo de epilepsia audiógena de origen genético cuyo foco epileptógeno es el colículo inferior (CI). Objetivos. Analizar el transcriptoma del CI para obtener un perfil de expresión de los genes relevantes en la línea GASH/Sal que podría usarse para buscar un vínculo común con la epilepsia humana. Metodología. Utilizando la técnica de ARN-Seq en la plataforma Illumina 75bp Single-End, se han obtenido dos tipos de transcriptomas de los CIs de hámsteres controles y de la línea GASH/Sal, ambos sometidos a estimulación auditiva, alineándolos con dos genomas de referencia distintos, el del hámster chino (Cricetulus griseus) y el del propio hámster sirio. Posterior análisis comparativo de los dos transcriptomas con ambos genomas de referencia, nos permitió obtener un conjunto de genes diferencialmente expresados y, seguidamente, en base a los criterios de la diferencia del nivel de expresión (Fold Change, |FC| >1.5), p valor (p < 0.05) y False Discovery Rate (FDR), seleccionar un pequeño grupo de genes que fueron validados por PCR cuantitativa (qPCR). Resultados. Se determinaron 41 y 33 genes diferencialmente expresados empleando como referencia el genoma del hámster sirio y el del hámster chino, respectivamente, siendo el del primero de ellos, el que presentó un mejor alineamiento por base, cobertura, porcentaje de homología y mayor sensibilidad en la detección de los transcriptos. La comparativa entre ambos grupos de genes mostró que eran coincidentes 12 genes y 9 de ellos (Atp2a3, C6, Egr1, Egr2, Egr3, Fos, Rxfp2, Slc28a1 y Ttr) se emplearon en la validación de las variaciones de expresión génica detectadas mediante la técnica de qPCR. Conclusiones. Los resultados muestran genes diferencialmente expresados en el CI de la línea de hámster sirio GASH/Sal que pueden servir como punto de partida para buscar los mecanismos epileptogénicos en este modelo animal y posibles correlaciones con la epilepsia humana.; [EN} The golden or Syrian hamster line (Mesocricetus auratus) GASH / Sal is a model of genetically derived audiogenic epilepsy whose epileptogenic focus is the inferior colliculus (IC). Objetives. Analyze the IC transcriptome to obtain an expression profile of the relevant genes in the GASH / Sal line that could be used to look for a common link with human epilepsy. Methodology. Using the RNA-Seq technique on the Illumina 75bp Single-End platform, two types of transcriptomes were obtained from the control hamster ICs and those from the GASH / Sal line, both subjected to auditory stimulation, aligning them with two different reference genomes., that of the Chinese hamster (Cricetulus griseus) and that of the Syrian hamster itself. Subsequent comparative analysis of the two types of transcriptomes, with both reference genomes, allowed us to obtain a set of differentially expressed genes and, subsequently, based on the criteria of the difference in expression level (Fold Change, | FC |> 1.5 ), p value (p <0.05) and False Discovery Rate (FDR), select a small group of genes that were validated by quantitative PCR (qPCR). Results. We determined 41 and 33 differentially expressed genes using the Syrian hamster genome and the Chinese hamster genome, respectively, being the first of them, which presented a better alignment by base, coverage, percentage of homology and greater sensitivity in the detection of transcripts. The comparison between both groups of genes showed that 12 genes were coincident and 9 of them (Atp2a3, C6, Egr1, Egr2, Egr3, Fos, Rxfp2, Slc28a1 and Ttr) were used in the validation of the variations of gene expression detected by the qPCR technique. Conclusion The results show genes differentially expressed in the IC of the Syrian hamster line GASH / Sal that can serve as a starting point to look for the epileptogenic mechanisms in this animal model and possible correlations with human epilepsy.

Cambios en la expresión de la Glicoproteína-P en el modelo de epilepsia GASH/SAL

Tue, 01 Jan 2019 00:00:00 GMT

[ES] Introducción. Diferentes estudios han demostrado un aumento de expresión de la glicoproteína-P en modelos de epilepsia y tejido humano refractarios. Estos trabajos relacionan dicha proteína con la resistencia a fármacos antiepilépticos. Objetivos. Estudiar posibles cambios de expresión de la glicoproteína-P (genes Abcb1a y Abcb1b) y otros miembros de la superfamilia de transportadores ABC: Abcg1, Abcc1, Abcc2, Abcc3, Abcc4, en el modelo de hámster con epilepsia audiogénica GASH/Sal. Secundariamente, nos planteamos evaluar las diferencias de expresión de los genes Hif-1α, Epo-R, Trpa1 y Trpc5, relacionados con la expresión y función de la glicoproteína-P. Metodología. Utilizando la técnica de qPCR, se analizaron cambios de expresión relativa de los genes de interés en el núcleo epileptógeno, entre los grupos de hámsteres control vs. GASH/Sal en (1) condiciones basales y (2) tras el kindling audiogénico, un modelo de estimulación acústica repetitiva que tiene como resultado el desarrollo e intensificación de las crisis convulsivas. Resultados. En condiciones basales, los genes Abcb1b, Abcg1, Abcc1, Abcc4, Epo-R, Hif-1α se encontraron significativamente aumentados en los animales GASH/Sal, mientras que Trpa1 y Trpc5 estaban disminuidos. En los grupos sometidos a kindling audiogénico, los genes Abcg1, Abcc4, Abcb1a y Hif-1α disminuyeron significativamente su expresión en el grupo GASH/Sal, mientras que Trpc5 la aumentó. Conclusión. De forma basal, el modelo GAHS/Sal presenta cambios en la expresión de genes que podrían estar participando en su susceptibilidad a sufrir crisis. En estos animales, la estimulación acústica repetitiva provoca una disminución de la expresión de ciertos genes, entre ellos Hif-1α, lo que parece indicar que hay una respuesta de tipo adaptativa que intenta disminuir la hipoxia y sus efectos a nivel genético.

Análisis del transcriptoma del foco epileptogénico en el modelo de epilepsia GASH/Sal

Sun, 29 Jul 2018 00:00:00 GMT

[ES]Introducción. El hámster GASH/Sal es un modelo de epilepsia audiógena de origen genético cuyo foco epileptogénico es el colículo inferior (CI). Objetivos. Analizar el transcriptoma del CI buscando obtener un perfil de los genes relevantes en el GASH/Sal que podría usarse para buscar un vínculo común con la epilepsia humana. Metodología. Hemos realizado un estudio de RNA-Seq provenientes del CI de hámsteres controles y GASH/Sal sometidos a estimulación auditiva, alineándolo con los genomas de referencia del hámster chino (Cricetus griseus) y dorado (Mesocricetus auratus) respectivamente, mediante la plataforma Illumina 75bp Single-End. Se selecionaron los genes que tuvieron una tasa de cambio (log Fold-Change) mayor a 1.5, estadísticamente significativa. Los genes diferencialmente expresados, se validaron por PCR cuantitativa. Resultados. Se observaron 41 genes diferencialmente expresados en la referencia del genoma Mesocricetus auratus y 32 en la de Cricetulus griseus, siendo doce genes similares en ambos análisis (Atp2a3, C6, Egr1, Egr2, Egr3, Fos, Fosb, Junb, Npas4, Rxfp2, Slc28a1 and Ttr). Adicionalmente, los genes diferencialmente expresados están relacionados con procesos biológicos de señalización, metabolismo y transporte, apareciendo disminuidos en el núcleo epileptógeno del GASH/Sal en comparación con el mismo núcleo del hámster control. Conclusiones. Los resultados revelan cambios moleculares en el colículo inferior del GASH/Sal que puede servir como punto de partida para buscar los mecanismos epileptogénicos en este modelo animal y posible correlaciones con la epilepsia humana.

Esquizofrenía y Glía

Thu, 01 Jan 2009 00:00:00 GMT

[ES]En este trabajo se estudia las relaciones de los astrocitos y los oligodendrocitos con las neuronas, ya que se han observado alteraciones en la esquizofrenia.; [EN]This paper studies the relationship of astrocytes and oligodendrocytes with neurons, and alterations have been observed in schizophrenia.

La Técnica de los Loci: procesos rehabilitativos de los sujetos MCI mediante estrategias lingüísticas

Thu, 01 Jan 2009 00:00:00 GMT

[ES]La técnica de los Loci dentro de los procesos rehabilitativos aporta resultados significativos tanto en sujetos normales como en ancianos con problemas de memoria; en particular se ha mostrado útil en los problemas de memoria episódica; de dificultad en procesar de manera rápida las informaciones de problemas en la memoria de trabajo; en la fluidez del razonamiento;en la orientación espacial y en las habilidades verbales.; [EN]The technique of Loci within the rehabilitative process provides significant results in both normal subjects and in elderly patients with memory problems, in particular has proved useful in episodic memory problems, difficulty in processing information quickly to problems working memory, in the flow of reasoning in spatial orientation and verbal skills.

Diseño de un test de memoria prospectiva: ¿por qué olvidamos realizar una tarea pendiente?

Thu, 01 Jan 2009 00:00:00 GMT

[ES]En este estudio se propone la hipótesis de que los fallos en la realización de la intención se dan precisamente en esa última fase del proceso: el sujeto es incapaz de abandonar la actividad en curso para llevar a cabo la intención. Se pone a prueba un test piloto de memoria prospectiva que consiste en una actividad base y una tarea prospectiva consistente en escoger objetos para una “lista de la compra”, obteniendo datos sobre número de olvidos intencionales y tiempo de respuesta.; This study hypothesizes that failures in the implementation of Intent are precisely at that stage of the process: the subject is unable to leave the ongoing activity to carry out the intent. It is testing a pilot test of prospective memory consisting of a base and an activity consisting in choosing prospective task objects to a "shopping list", obtaining data on the number of deliberate omissions and response time.

Contribuciones neuropsicológicas al diagnóstico del deterioro cognitivo leve

Thu, 01 Jan 2009 00:00:00 GMT

[ES]El Deterioro Cognitivo Leve (DCL) es un término que indica un estado inicial en proceso demencial; considerado por algunos una situación precoz de la demencia en especial la de tipo Alzheimer, y por otros una entidad independiente.; [EN]Mild Cognitive Impairment (MCI) is a term that indicates an initial state in the process crazy, considered by some a situation early dementia especially Alzheimer type, and other independent entities.

Efectos del ácido retinoico en el desarrollo temprano del pez cebra Danio rerio

Thu, 01 Jan 2009 00:00:00 GMT

[ES]Este trabajo trata sobre los efectos del ácido retinoico en el desarrollo temprano del pez cebra Danio rerio.; [EN]This work deals with the effects of retinoic acid in the early development of zebrafish Danio rerio.

Cambios en el colículo inferior de la rata tras ablación cortical auditiva unilateral

Thu, 01 Jan 2009 00:00:00 GMT

[ES]El presente trabajo trata sobre los cambios en el colículo inferior de la rata tras ablación cortical auditiva unilateral.; [En]This paper deals with changes in the inferior colliculus of the rat after unilateral auditory cortex ablation.

Análisis inmunocitoquímico de la expresión de PCNA Y PROX-1 durante el desarrollo de la vía visual del pez cebra mutante cyc m294

Thu, 01 Jan 2009 00:00:00 GMT

[ES] Se aborda experimentalmente el análisis de malformaciones congénitas en los humanos mediante el estudio del desarrollo del pez teleósteo Danio rerio, conocido como pez cebra.; [EN] It addresses the analysis of experimental congenital malformations in humans by studying the development of the teleost fish Danio rerio, known as zebrafish.

Papel de la proteína Bex-3 en la ubiquitinación del receptor TrkA

Thu, 01 Jan 2009 00:00:00 GMT

[ES]El presente trabajo trata del papel de la proteína Bex-3 en la ubiquitinación del receptor TrkA; [EN]This paper studies the role of Bex protein-3 in the TrkA receptor ubiquitination

Redes bayesianas y redes neuronales como modelos del aprendizaje casual

Thu, 01 Jan 2009 00:00:00 GMT

[ES]Este trabajo trata sobre las redes bayesianas y neuronales como modelos del aprendizaje casual.; [EN]This paper deals with bayesian and neural networks as models of casual learning.

Cinesiología del desarrollo en lactantes

Thu, 01 Jan 2009 00:00:00 GMT

[ES]En este trabajo se ha realizado el estudio de 47 niños/as con el requisito imprescindible de que estuvieran diagnosticados con alteración de la coordinación central, retraso motor o ambas, según las pruebas de reactibilidad postural de Vojta.; [EN]In this work we have done the study of 47 children with the condition imperative that they were diagnosed with impaired central coordination, motor retardation or both, on the evidence reactibilidad Vojta postural.

Expresión de receptores cannabinoides en el desarrollo embrionario del pez cebra

Thu, 01 Jan 2009 00:00:00 GMT

[ES]Este trabajo trata sobre la expresión de receptores cannabinoides en el desarrollo embrionario del pez cebra; [EN]This paper deals with the expression of cannabinoid receptors in the embryonic development of zebrafish