Potenciación de la capacidad apoptótica y oncolítica del virus de la enfermedad de Newcastle mediante el desarrollo de recombinantes con el gen para el TNFRSF6 (FAS-Receptor). Estudios “in vitro” e “in vivo”

Abstract

[ES] El virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) es un virus RNA de polaridad negativa perteneciente al Género Avulavirus incluido en la Familia Paramyxoviridae. La capacidad oncolítica innata de este virus y el desarrollo de las técnicas de genética inversa, lo predisponen a ser un firme candidato para el desarrollo de virus modificados y su uso como agentes antitumorales. En nuestro trabajo se han desarrollado dos virus recombinantes, rNDV-B1/FAS y rNDV-B1/FEX, a partir de la ORF del gen para el receptor humano FAS y sobre la base genética de la cepa lentogénica Hitchner-B1. Durante la infección de las diferentes líneas celulares evaluadas en nuestro trabajo, se incorporaron al ciclo replicativo original del virus la expresión y síntesis de la proteínas TNFRSF6 (FAS-receptor) y la quimérica FEX (FAS-receptor/proteína F). La sobreexpresión del receptor FAS y de la proteína hibrida FEX (Nt-FAS/TM-Cyt F), ha demostrado modificar la capacidad apoptótica de los virus, siendo en el caso de FAS la responsable de potenciar la respuesta de muerte durante la infección, reduciendo de manera muy significativa la viabilidad de las células y presentándose en todos los casos, de forma más temprana y en mayor grado, los fenotipos asociados a la activación de la apoptosis. Los resultados obtenidos en modelos de tumores singénicos de cáncer de colon y melanoma desarrollados en ratón ponen de manifiesto que el tratamiento con los virus rNDV-B1/FAS y rNDV-B1/FEX no solo aumenta la supervivencia de los individuos del estudio sino que además desencadena la remission de los tumores y posiblemente la aparición de memoria inmunológica frente al tumor

[EN] The disease virus (NDV) is a negative-polarity RNA virus belonging to the genus Avulavirus included in the Family Paramyxoviridae. The innate oncolytic ability of this virus and the development of reverse genetics techniques, which predispose to be a strong candidate for the development of modified virus and their use as antitumor agents. In our work we have developed two recombinant viruses, and rNDV-B1/FEX rNDV-B1/FAS, from the ORF of the human receptor gene for the FAS and the genetic basis of lentogenic strain Hitchner-B1. During infection of the different cell lines tested in our study, were incorporated into the original virus replication cycle expression and protein synthesis TNFRSF6 (FAS-receptor) and chimeric FEX (FAS-receptor/proteína F). FAS receptor overexpression of the protein and hybridizes FEX (Nt-FAS/TM-Cyt F) demonstrated apoptotic modify the capacity of the virus, being in the case of FAS responsible for enhancing the death response during infection, very significantly reducing viability of the cells and appearing in all cases, so earlier and to a greater degree, the phenotypes associated with the activation of apoptosis. The results obtained in syngeneic tumor models of colon cancer and melanoma in mouse developed demonstrate that treatment with the virus and rNDV-B1/FEX rNDV-B1/FAS not only increases the survival of the individuals of the study but also triggers the remission of tumors and possibly the emergence of immune memory in the face of tumor