Resumen de tesis. Análisis a gran escala de interacciones entre proteínas de membrana empleando el ensayo de las Split-Ubiquitin en la levadura Saccharomyces Cerevisiae

Abstract

[ES] La organización de proteínas en complejos proteicos es esencial para llevar a cabo las funciones celulares de manera coordinada. El estudio de interacciones entre proteínas no solo amplía información sobre el funcionamiento de proteínas ya conocidas sino que además también permite identificar el papel celular de proteínas de función desconocida. En la actualidad existen gran cantidad de métodos y técnicas para analizar interacciones entre proteínas solubles, por el contrario, la metodología para el estudio de las interacciones entre proteínas de membrana está menos desarrollada. Entre los métodos de análisis de interacciones proteicas para proteínas de membrana está el método del tipo cebo-presa de la Split-ubiquitin o SU que no necesita la solubilización de las proteínas en análisis lo que permite su localización en la membrana donde tienen una conformación similar a la nativa. En el trabajo recogido en la memoria de tesis se utiliza el método de la SU adaptado a gran escala para analizar de forma sistemática la interacción de un grupo de 173 proteínas cebo con 413 proteínas presa. El grupo de proteínas seleccionadas pertenece a la planta fanerógama Arabidopsis thaliana y está enriquecido en proteínas con dominios transmembrana que llevan a cabo funciones relacionadas con el transporte de sustancias a través de membrana o con la recepción de estímulos. Los resultados obtenidos revelan la existencia de 1453 interacciones positivas, siendo en su mayoría interacciones no descritas con anterioridad A. thaliana y que suponen una contribución al interactoma de esta planta. Además de aportar información sobre un gran número de interacciones entre proteínas cuyo significado biológico no es posible interpretar en este momento debido al gran desconocimiento que se tiene sobre función de las proteínas de membrana en plantas, este estudio la permitido proponer relaciones físicas y funcionales entre proteínas pertenecientes a la familia de las acuaporinas, de los transportadores de nitratos, de las permeasas de purinas, de los canales iónicos, de los transportadores de cationes monovalentes, de las proteínas transportadoras de aminoácidos y de los receptores de membrana de tipo MLO.

[EN] The organization of proteins in protein complexes is essential to carry out cellular functions in a coordinated manner. The study of protein-protein interactions not only expands information about the operation of already known proteins but also paper also identifies the cellular proteins of unknown function. At present there are plenty of methods and techniques for analyzing interactions between soluble proteins, by contrast, the methodology for the study of interactions between membrane proteins is less well developed. Among the methods of analysis of protein-protein interactions of membrane type is the method of bait-prey SU Split-ubiquitin or not requiring the solubilization of proteins in analysis which allows its location in the membrane where they have a similar conformation the native. At work contained in theses memory using the SU method adapted for large-scale systematically analyze the interaction of a group of 173 413 bait proteins prey proteins. The selected group of proteins belonging to the flowering plant Arabidopsis thaliana and is enriched in proteins with transmembrane domains that perform functions related to the transport of substances through the membrane or with the reception of stimuli. The results reveal the existence of positive interactions 1453, being mostly previously undescribed interactions A. thaliana and involving a contribution to this plant interactome. In addition to providing information about a large number of interactions between proteins whose biological significance can not be interpreted at this time due to widespread ignorance that exists about the function of membrane proteins in plants, this study allowed us to propose the physical and functional relationships between proteins belonging to the family of aquaporin, transporters nitrates of purine permease, ion channels, transporters monovalent cations of amino acid transporter proteins and membrane receptors MLO type.