Caracterización bioquímica y funcional de proteínas que interaccionan con fosfatasas 2C en germinación y respuestas a estrés reguladas por ABA.

Abstract

[ES] La proteín-fosfatasa FsPP2C1, fue aislada de la especie leñosa Fagus sylvatica (haya), sea descrito como regulador negativo de la señalización del Ácido Abscisico, en esta investigación, para obtener una visión más profunda sobre la función de FsPP2C1, nos proponemos identificar las proteínas que interactúan con esta proteína, mediante ensayo de doble híbrido en levadura, se han identificado dos proteínas (PYL8/RCAR3 y PYL7/RCAR2) miembros de la familia PYR1-PYL/RCAR. Por expresión transitoria de FsPP2C1 y PYL8/RCAR3 ) como proteínas de fusión de proteína fluorescente verde en las células epidérmicas de cebolla (Allium cepa) y agroinfiltración en tabaco ( Nicotiana benthamiana), se obtuvo la evidencia que la localización subcelular de FsPP2C1 y PYL8/RCAR3 es en el núcleo ycitosol y núcleo , respectivamente. La interacción entre ambas proteínas se comprobó mediante la técnica de complementación bimolecular fluorescente (BIFC), determinando que la interacción es nuclear. La sobreexpresión constitutiva de PYL8/RCAR3 confiere hipersensibilidad al ABA en semillas de Arabidopsis y, en consecuencia, un mayor grado de latencia de las semillas. Además, las Plantas transgénicas 35S: PYL8/RCAR3 son incapaces de germinar en presencia de bajas concentraciones de manitol , NaCl , o paclobutrazol. En tejidos vegetativos, las plantas transgénicas de Arabidopsis PYL8/RCAR3 muestran resistentencia a respuesta a la sequía y una fuerte inhibición en el crecimiento de las raíces en presencia de ABA. Estos fenotipos son fortalecidas a nivel molecular con mayor inducción de varios genes de respuesta ABA. Tanto en semillas y fenotipos vegetativos las plantas 35S: PYL8/RCAR3 de Arabidopsis son opuestas a las plantas 35S :FsPP2C1 . Finalmente, las plantas dobles transgénicas confirman el papel de PYL8/RCAR3 antagonizando la función y FsPP2C1 lo que demuestra que PYL8/RCAR3 regula positivamente la señalización del ABA durante las respuestas de germinación y de estrés abiótico.