Silenciamiento de la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PDH) en células de carcinoma de riñón humano HEK-293T, mediante la técnica del ARN de interferencia

Abstract

The role of pentose-phosphate pathway and its involvement in glycolysis is nowadays still unknown. Recent findings have shown a direct relationship between the over-expression of this pathway and the uncontrolled proliferation of differents malign tumours. Clarifying the the importance of this pathway has therefore become an important key in the fight against cancer. This study has silenced the gene of the enzyme which catalyses the first reaction of this pathway, glucose-6-phosphate dehydrogenase, by RNA interference in human renal carcinoma cells HEK-293T. The effect of silencing this gene was controlled by measuring lactate (μmol/mg protein)/24h, using cells with the luciferase gen silenced as the control group. The results from this study show an important decrease in the production of lactate in cells with the silenced enzyme: 2,73 μmol/mg protein/24h compared to 7,81 μmol/mg protein/24h in the control group. This decrease clearly shows how the pentose-phosphate pathway highly contributes to the production of pyruvate through the glycolysis.

El papel de la ruta de las pentosas fosfato, así como su contribución total en la glucólisis son a día de hoy todavía una incógnita. Tras haberse descubierto recientemente una relación directa entre una sobreexpresión de dicha ruta y la proliferación de diversos tumores malignos, clarificar ambas cuestiones ha cobrado especial importancia en la lucha contra el cáncer. En este estudio se ha realizado el silenciamiento de la enzima que cataliza la primera reacción de dicha ruta, la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, por medio del ARN de interferencia y utilizando como línea celular células de carcinoma de riñón humano HEK-293T. La medición de la repercusión del silenciamiento se ha realizado mediante la medida de lactato (μmol/mg de proteína)/24h, utilizándose células con el gen de la luciferasa silenciado como grupo control. Los resultados obtenidos han puesto de manifiesto una notoria disminución de la producción de lactato en las células con la enzima silenciada: 2.73 μmol/mg de proteína/24h en comparación con 7.81 μmol/mg de proteína/24h en el grupo control; lo que nos lleva a la conclusión de que la ruta de las pentosas fosfato contribuye de manera muy significativa en la producción de piruvato por medio de la glucólisis.