Silenciamiento de la fosfoglucosa isomerasa (PGI) en fibroblastos inmortalizados de ratón. Mediante la técnica del RNA de interferencia

Abstract

[EN]A target-specific small hairpin RNA (shRNA) was added into a plasmid delivery system (pSUPER-NeoGFP) and introduced into a cell culture of mouse embryonic fibroblasts (MEFs). The shRNA was constructed for suppressing the expression in mice cells glucose-6-phosphate isomerase PGIm. Glucose-6-phosphate isomerase is an enzyme that catalyses the conversion of glucose-6-phosphate into fructose 6-phosphate in glycolysis’ second step. A PEI–polyethylene glycol conjugate was used as a pSUPER-NeoGFP-shPGI plasmid carrier. Two cultures of cells were transformed one used as control with the plasmid delivery system (pSUPER-NeoGFP) and the other with the plasmid with the sh-PGI. The gene inhibition and cellular uptake behaviours were explored by the measurement of lactic acid as a marker of the efficiency of glycolysis and with a reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) to quantify PGIm expresion. No significatively differences were found in the lactic acid production while a decrease in the PGIm expresion was observed.

[ES]Se introdujo un fragmento de sh-RNA específico en un plásmido vector pSUPER-NeoGFP con el que se transformó un cultivo celular de fibroblastos embrionarios de ratón (MEFs). El sh-RNA fue construido para la inhibición específica de la expresión celular de la glucosa-6-fosfato isomerasa (PGIm). La glucosa-6-fosfato isomerasa es la segunda enzima de la glucolisis que cataliza la isomerización de glucosa-6-fosfato en fructosa-6-fosfato. Un polímero catiónico de polietilen glicol fue utilizado como vehículo para transformar las células. Se transformaron dos cultivos celulares, uno usado como control transformado sólo con el plásmido vector y otro con el plásmido con el sh-RNA. La inhibición celular y el metabolismo fueron controlados con la medida de la producción de lactato como marcador de la eficiencia de la glucolisis. Y con una RT-PCR para cuantificar la expresión de la PGIm. No se encontraron diferencias estadísticamente significativas en la producción de lactato entre ambos cultivos pero sí se observó una disminución de la expresión génica de la PGIm.