Diseño, desarrollo y aplicación de la tecnología LAMP para el diagnóstico de la esquistosomosis: del laboratorio al campo

Abstract

[POR]Esquistossomose, uma doença parasitária causada por trematódeos dogênero Schistosoma, é uma das principais doenças tropicais desantendidas.Atualmente não há um método diagnóstico adequado, como técnicas parasitológicase sorológicas têm problemas de sensibilidade e especificidade. O diagnósticomolecular não é rotineiramente utilizada, particularmente em áreas endémicas epobre. A técnica LAMP é uma amplificação de ADN é realizada sob condiçõesisotérmicas. Tem as vantagens de ser rápida, sensível, específica, permite que osresultados de discriminação visual e pode ser aplicada como um diagnóstico point-ofcare.Neste trabalho foram concebidos, desenvolvidos e aplicados métodosmoleculares baseados na tecnologia LAMP para o diagnóstico de Schistosomamansoni e Schistosoma haematobium, e para detectar caracóis infectados com S.mansoni. Em primeiro lugar, uma técnica foi desenvolvida para a amplificação de ADNde S. mansoni, chamada SmMIT-LAMP, o qual provou ser eficaz para a detecção doparasita na fase aguda da infecção. A sua aplicação em amostras humanas e decaracois numa área endémica de baixa transmissão no Brasil tem mostrado altasensibilidade em relação às técnicas convencionais de diagnóstico e sua utilidadepara identificar focos de transmissão da doença. Estes estudos são detalhados notrabalho 1 e 5. Em seguida, outro método LAMP (Sh-LAMP) para a detecção de S.haematobium foi concebido. Ele foi otimizado em amostras clínicas de urina no laboratório com e sem extracção de ADN (Rapid-Heat LAMPellet method) e,subsequentemente, avaliadas com sucesso numa zona de transmissão em Angola.Além disso, Sh-LAMP mostrou elevada reprodutibilidade no laboratório dereferência. Estes estudos são recolhidos no trabalho 2 e 4. Finalmente, Biompha-LAMP mostrou-se útil para a detecção de S. mansoni emcaracóis infectados experimentalmente. Este estudo é o trabalho detalhado 3.

[ES]La esquistosomosis, una enfermedad parasitaria producida por trematodos del género Schistosoma, es una de las principales enfermedades tropicales desantendidas. En la actualidad no se dispone de un método de diagnóstico adecuado ya que las técnicas parasitológicas y serológicas presentan problemas de sensibilidad y especificidad. El diagnóstico molecular no se utiliza de forma rutinaria, particularmente en zonas endémicas y de bajos recursos. El LAMP (loop-mediated isothermal amplification) es una técnica de amplificación de ADN que se realiza en condiciones isotérmicas. Presenta las ventajas de ser rápida, sensible, específica, permite la discriminación visual de los resultados y puede ser aplicada como diagnóstico point-of-care. En este trabajo se diseñaron, desarrollaron y aplicaron métodos moleculares basados en la tecnología LAMP para el diagnóstico de Schistosoma mansoni y Schistosoma haematobium, así como para la detección de caracoles infectados con S. mansoni. En primer lugar, se desarrolló una técnica de amplificación de ADN de S. mansoni, denominada SmMIT-LAMP, que ha mostrado su efectividad para la detección del parásito en la fase aguda de la infección. Su aplicación en muestras humanas y de caracoles en un área endémica de baja transmisión en Brasil ha demostrado una alta sensibilidad en comparación con las técnicas de diagnóstico clásicas, así como su utilidad para la identificación de focos de transmisión de la enfermedad. Estos estudios se detallan en los trabajos 1 y 5. A continuación se diseñó otro método LAMP (Sh-LAMP) para la detección de S. haematobium. Se puso a punto en muestras clínicas de orina en el laboratorio con y sin extracción previa de ADN (Rapid-Heat LAMPellet method) y posteriormente se evaluó con éxito en una zona de alta transmisión en Angola. Además, Sh-LAMP mostró una elevada reproducibilidad en un laboratorio de referencia. Estos estudios se encuentran recogidos en los trabajos 2 y 4. Finalmente, Biompha-LAMP mostró ser una herramienta útil para la detección de S. mansoni en caracoles infectados experimentalmente. Este estudio se encuentra detallado en el trabajo 3.