Aplicación de la técnica LAMP para la detección de Loa loa y Mansonella perstans

Abstract

Filariases are endemic diseases of tropical regions caused by filiform nematodes transmitted by insect bites. They produce high morbidity. Loiasis (Loa Loa) and mansonellosis (Mansonella perstans) globally affect 10 and 100 million people, respectively. The diagnosis of certainty is parasitological, but it does not detect early infections or low microfilaeremia, and it is necessary to consider the periodicity of microphilaremias in blood. Molecular techniques, such as PCR, have great sensitivity and specificity, but they are expensive, technically complex and require infrastructure not available in endemic areas of scarce resources. LAMP technology (loop-mediated isothermal amplification) has advantages over PCR as faster, scarce equipment, more tolerant of inhibitors and the results can be observed colorimetrically. In this work, LAMP technology is applied and evaluated for the detection of DNA from Loa loa and M. perstans in 22 blood samples stored on filter paper from individuals living in Equatorial Guinea. The samples were analyzed microscopically, using qPCR and LAMP. The molecular methods were more sensitive than microscopy. LAMP resulted more sensitive than qPCR for the detection of DNA from Loa loa and M. perstans.

Las filariosis son enfermedades endémicas de regiones tropicales ocasionadas por nematodos filiformes trasmitidos por la picadura de insectos. Producen elevada morbilidad. La loaosis (Loa Loa) y la mansonelosis (Mansonella perstans) afectan globalmente a 10 y 100 millones de personas, respectivamente. El diagnóstico de certeza es parasitológico, pero no detecta infecciones precoces o bajas microfilaremias y hay que considerar la periodicidad de las microfilarias en sangre. Las técnicas moleculares, como la PCR, tienen gran sensibilidad y especificidad, pero son caras, técnicamente complejas y requieren infraestructura no disponible en zonas endémicas de escasos recursos. La tecnología LAMP (loop-mediated isothermal amplification) presenta ventajas sobre la PCR como mayor rapidez, escaso equipamiento, más tolerante a inhibidores y los resultados pueden observarse colorimétricamente. En este trabajo se aplica y valora la tecnología LAMP para la detección de ADN de Loa loa y M. perstans en 22 muestras de sangre almacenadas en papel de filtro de individuos residentes en Guinea Ecuatorial. Las muestras se analizaron microscópicamente, mediante qPCR y LAMP. Los métodos moleculares resultaron más sensibles que la microscopía. El LAMP resultó más sensible que la qPCR para la detección de ADN de Loa loa y M. perstans.