Characterization of novel genes and variants involved in Congenital Platelet Disorders: from the genomic data to the functional studies

Abstract

[ES] El objetivo general de este estudio es: caracterizar el fenotipo clínico y plaquetario asociado a las alteraciones moleculares encontradas por secuenciación de alto rendimiento en genes implicados en los Trastornos Plaquetarios Congénitos, y demostrar el mecanismo relacionado con la patogenicidad utilizando cultivos de megacariocitos in vitro y ex vivo, y modelos de enfermedad in vivo generados por la tecnología CRISPR/Cas9. Como objetivos específicos planteados, se encuentran: • Caracterización funcional de la variante RUNX1 p.Leu56Ser, encontrada previamente por un panel de genes de diseño propio, utilizando una aproximación in vivo. o Generar un modelo murino knock-in portador de la variante RUNX1 p.Leu43Ser (que imita a la variante en línea germinal humana p.Leu56Ser) mediante CRISPR/Cas9, para establecer su implicación en el trastorno plaquetario. o Conocer las vías de señalización y los determinantes biológicos que subyacen a la progresión leucémica asociada a las variantes de RUNX1. • Aplicación de la secuenciación del exoma completo para la identificación de nuevos genes implicados en los Trastornos Plaquetarios Congénitos, y evaluación de los mecanismos fisiopatológicos que originan la enfermedad mediante modelos funcionales in vivo y ex vivo. o Analizar el fenotipo clínico y de laboratorio de la tercera familia en el mundo con trombocitopenia asociada a variantes en TPM4, y caracterizar en profundidad su papel en la remodelación del citoesqueleto plaquetario. o Evaluar el fenotipo clínico y plaquetario de tres pacientes de dos familias no relacionadas con macrotrombocitopenia sindrómica asociada a variantes en heterocigosis compuesta en GALE. o Investigar el efecto funcional de las variantes genéticas identificadas en GALE durante la megacariopoyesis y la trombopoyesis, y su papel en la glicosilación de los megacariocitos y las plaquetas utilizando un modelo de sobreexpresión in vitro y un cultivo ex vivo de megacariocitos de pacientes.