Resumen de tesis. Tecnología LAMP: avances en el diagnóstico de esquistosomosis y estrongiloidosis

Abstract

[ES]Las Enfermedades Tropicales Olvidadas o Desatendidas (NTDs; del inglés Neglected Tropical Diseases) son un grupo heterogéneo de 20 entidades, de elevada prevalencia principalmente en áreas tropicales y subtropicales, que afectan a más de mil millones de personas pertenecientes a comunidades empobrecidas con consecuencias devastadoras en el ámbito social, económico y de la salud. Geográficamente, las regiones más afectadas por las NTDs son el África subsahariana, el sureste asiático y las regiones tropicales de América. Sin embargo, en los países occidentales, el número de casos importados de algunas de estas NTDs, como la esquistosomosis y la estrongiloidosis, ha ido incrementando en los últimos años debido al aumento del flujo migratorio y los viajes a regiones endémicas de estas enfermedades. En relación a la esquistosomosis, se han registrado ya casos de transmisión autóctona en Europa, incluyendo España, y la aparición de formas híbridas que pueden tener consecuencias en el diagnóstico, transmisión y morbilidad de la enfermedad. La estrongiloidosis importada también ha sufrido un incremento en su diagnóstico en áreas no endémicas, convirtiéndose según los últimos estudios en un reto para la Salud Pública mundial. Por otra parte, hay que destacar que las coinfecciones de estas dos enfermedades son frecuentes debido al solapamiento geográfico de sus áreas de distribución. Los problemas de diagnóstico a los que se enfrentan estas enfermedades, especialmente en zonas endémicas de bajos recursos, son la falta de sensibilidad de las técnicas tradicionales y la incapacidad de aplicación de metodologías con elevada sensibilidad y especificidad como los métodos moleculares, ya que requieren de equipos complejos que tienen un coste elevado. La técnica de amplificación isotérmica de ácidos nucleicos LAMP (del inglés, Loop-mediated isothermal amplification), presenta las ventajas de rapidez, sencillez, especificidad y fácil aplicación en campo, necesarias para ser un método adecuado para el diagnóstico de las NTDs. El LAMP ya ha sido utilizado con éxito para el diagnóstico de esquistosomosis en estudios de campo en áreas de escasos recursos. Sin embargo, aún no se ha utilizado para la posible detección de híbridos. En el caso de la estrongiloidosis, los estudios con la tecnología LAMP son más limitados, y ninguno de ellos ha evaluado su eficacia en el terreno. Las ventajas de desarrollar un método LAMP múltiplex, que permita la detección simultánea de coinfecciones, supondría un gran avance en el diagnóstico de estas enfermedades. Los métodos utilizados para el desarrollo de un LAMP múltiplex son variados, y hasta la fecha no están estandarizados. En este contexto, teniendo en cuenta la reciente aparición e introducción de formas híbridas de esquistosomas en áreas no endémicas, y la elevada prevalencia de coinfecciones en zonas endémicas, nos planteamos como hipótesis de trabajo la necesidad de disponer de un método LAMP múltiplex que permita la detección simultánea de varios patógenos en un mismo ensayo. Todo ello, buscando la posibilidad de su adaptación al diagnóstico point-of-care de las NTDs. Así, nos propusimos como objetivo general la aplicación de la tecnología LAMP y la adaptación a un formato múltiple que permita su uso como diagnóstico point-of-care y la detección simultánea de varios patógenos. Para ello, se definieron diversos objetivos específicos que se van logrando en los diferentes artículos de investigación presentados en esta Tesis Doctoral. [POR]As Doenças Tropicais Negligenciadas (NTDs, em inglês Neglected Tropical Diseases) são um grupo heterogéneo de 20 entidades, altamente prevalecentes sobretudo em zonas tropicais e subtropicais, que afectam a mais de mil milhões de pessoas em comunidades empobrecidas, com consequências devastadoras a nível social, económico e de saúde. Geograficamente, as regiões mais afectadas pelas NTDs são a África Subsariana, o Sudeste Asiático e as regiões tropicais das Américas. Contudo, nos países ocidentais, o número de casos importados de algumas destas NTDs, como a esquistossomose e a estrongiloidose, tem vindo a aumentar nos últimos anos devido ao aumento da migração e das viagens para regiões endémicas destas doenças. Em relação à esquistossomose, já foram notificados casos de transmissão autóctone na Europa, incluindo em Espanha, e o aparecimento de formas híbridas pode ter consequências para o diagnóstico, a transmissão e a morbilidade da doença. A estrongiloidose importada também tem sido cada vez mais diagnosticada em áreas não endémicas, o que, de acordo com os estudos mais recentes, a torna um desafio de saúde pública global. Por outro lado, é de salientar que as co-infecções destas duas doenças são frequentes devido à sobreposição geográfica das suas áreas de distribuição. Os problemas de diagnóstico enfrentados por estas doenças, especialmente em áreas endémicas com poucos recursos, são a falta de sensibilidade das técnicas tradicionais e a incapacidade de aplicar metodologias com elevada sensibilidade e especificidade, como os métodos moleculares, uma vez que requerem equipamento complexo e dispendioso. A técnica LAMP (em inglês; Loop-mediated isothermal amplification) tem as vantagens da rapidez, simplicidade, especificidade e a fácil aplicação no terreno necessárias para ser um método adequado para o diagnóstico de NTD. A técnica LAMP já foi utilizada com êxito para o diagnóstico da esquistossomose em estudos de campo em zonas com poucos recursos. No entanto, ainda não foi utilizado para a detecção de possíveis híbridos. No caso da estrongiloidose, os estudos com a tecnologia LAMP são mais limitados e nenhum deles avaliou a sua eficácia no terreno. As vantagens do desenvolvimento de um método LAMP multiplex, permitindo a detecção simultânea de co-infecções, seriam um grande avanço no diagnóstico destas doenças. Os métodos utilizados para o desenvolvimento de um LAMP multiplex são variados e, até à data, não estão normalizados. Neste contexto, tendo em conta o recente aparecimento e introdução de formas híbridas de esquistossomas em áreas não endémicas, e a elevada prevalência de co-infecções em áreas endémicas, propomos como hipótese de trabalho a necessidade de um método LAMP multiplex que permita a detecção simultânea de vários agentes patogénicos no mesmo ensaio. Tudo isto, procurando a possibilidade de o adaptar ao diagnóstico de NTD no local de prestação de cuidados. Assim, estabelecemos o objectivo geral a aplicação da tecnologia LAMP e a sua adaptação a um formato múltiplo que permita a sua utilização como diagnóstico point-of care e a detecção simultânea de vários agentes patogénicos. Para tal, foram definidos vários objectivos específicos, que estão a ser concretizados nos diferentes artigos de investigação apresentados nesta Tese de Doutoramento.