Implementación metodológica fundamentada en la combinación de biosensores de especies reactivas del oxígeno y nitrógeno (RONS) y análisis cuantitativo de imagen de microscopía de fluorescencia para el estudio del papel señalizador y modulador de las RONS en la captación de glucosa en el músculo esquelético

Abstract

[ES] La investigación a la que se refiere este registro hace referencia a una tesis elaborada por compendio de publicaciones. El objetivo general de este trabajo consistió en implementar nuevas técnicas basadas en la utilización de biosensores intracelulares en el músculo esquelético que permitan la detección específica de peróxido de hidrógeno, óxido nítrico o del estado redox celular. Investigar si la aplicación de diferentes estímulos aplicados a la fibra muscular (i.e. exposición hormonal u otros compuestos químicos) provoca cambios en la concentración de peróxido de hidrógeno y óxido nítrico, y si afecta a la captación de glucosa y de esta manera, a la resistencia a insulina que se manifestaría en el envejecimiento o en la diabetes tipo 2. El objetivo general se divide en los siguientes: Desarrollar y validar las técnicas para internalizar los vectores, en los que se encuentra la secuencia codificante de los biosensores de peróxido de hidrógeno, óxido nítrico y estado redox del glutatión, en células de músculo esquelético: línea celular de mioblastos / miotubos C2C12 y fibras musculares individuales aisladas del músculo flexor digitorum brevis, y conseguir la expresión de estos biosensores de RONS en estas células. Validación funcional de los biosensores de RONS para la detección y cuantificación del flujo intracelular de RONS que pueda ser ocasionado por diferentes intervenciones experimentales que puedan producir cambios en la homeostasis intracelular de las RONS. Desarrollo y optimización de una metodología basada en el análogo de glucosa 6-NBDG y microscopia de fluorescencia cuantitativa, que permita la determinación de la captación de glucosa en células de músculo esquelético: línea celular de mioblastos/miotubos C2C12 y fibras musculares individuales aisladas del músculo flexor digitorum brevis. Ensayar diferentes agentes que pueden afectar a la homeostasis de las RONS, de forma específica a la concentración intracelular de peróxido de hidrógeno o al óxido nítrico, y también al estado redox y comprobar en qué medida estos cambios afectan a la captación de glucosa por las células musculares: mioblastos/miotubos C2C12 y fibras musculares individuales aisladas del músculo flexor digitorum brevis.