Optimized protocol for isolation and culture of murine neonatal primary lung fibroblasts

Abstract

[ES]Durante todas las etapas del desarrollo pulmonar, el mesodermo pulmonar (o mesénquima) está estrechamente relacionado con el endodermo, y su regulación cruzada promueve, controla e impulsa todos los procesos de desarrollo pulmonar. La generación de organoides 3D in vitro, ensayos de ARN y estudios de respiración mitocondrial se utilizan para analizar el desarrollo y la regeneración pulmonar para comprender mejor las interacciones entre el epitelio y el mesénquima, así como para el estudio de las alteraciones redox y el estado metabólico de las células. Además, para evitar el uso de líneas celulares inmortalizadas en estos enfoques in vitro, son esenciales técnicas estandarizadas de aislamiento de fibroblastos de pulmón primario neonatal murino. Aquí presentamos un método optimizado para aislar, cultivar y congelar fibroblastos pulmonares primarios de pulmones neonatales. Nuestro método actual incluye instrucciones paso a paso acompañadas de explicaciones gráficas y pasos críticos.

[EN]During all the stages of lung development, the lung mesoderm (or mesenchyme) is closely related to the endoderm, and their cross‐regulation promotes, controls, and drives all lung devel‐ opmental processes. Generation of 3D organoids in vitro, RNA assays, and mitochondrial respira‐ tion studies are used to analyze lung development and regeneration to better understand the inter‐ actions between epithelium and mesenchyme, as well as for the study of redox alterations and the metabolic status of the cells. Moreover, to avoid using immortalized cell lines in these in vitro ap‐ proaches, standardized murine neonatal primary lung fibroblast isolation techniques are essential. Here, we present an optimized method to isolate, culture, and freeze primary lung fibroblasts from neonatal lungs. Our current method includes step‐by‐step instructions accompanied by graphical explanations and critical steps.