[EN] Esta Tesis Doctoral se centra en el desarrollo y validación de metodologías analíticas rápidas, fiables y aplicables para la determinación de contaminantes exógenos y biomarcadores endógenos en orina humana, una matriz biológica no invasiva. Se han empleado diversos enfoques instrumentales, combinando espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS) con configuraciones separativas y no separativas, así como un método de cribado basado en fluorescencia. Uno de los principales objetivos ha sido ofrecer alternativas más accesibles y eficientes frente a los métodos convencionales, que suelen requerir derivatización compleja y largos tiempos de análisis.
En el Capítulo I, se desarrolló un método mediante cromatografía líquida de interacción hidrofílica (HILIC-MS/MS) para la determinación directa de malondialdehído (MDA) sin derivatización. El pretratamiento de muestra se limitó a una hidrólisis alcalina y posterior dilución, con un tiempo de análisis de solo 5 minutos.
El Capítulo II describe una técnica no separativa basada en materiales de acceso restringido (RAM) acoplados directamente al espectrómetro de masas, aplicada a los metabolitos DPhP y BDCPP. El método permitió el análisis en menos de 5 minutos y mostró buena precisión y exactitud, siendo validado con muestras certificadas.
En el Capítulo III, se integraron ambos enfoques en una única plataforma instrumental para la determinación simultánea de MDA y DPhP. Se aplicó a 72 muestras reales de orina y se observó una correlación positiva significativa entre ambos compuestos, especialmente en mujeres, lo que sugiere una posible relación entre la exposición a retardantes de llama y el estrés oxidativo.
Por último, el Capítulo IV presenta un método fluorimétrico en microplaca para MDA, basado en una reacción de derivatización con 2-aminacridona (2-AA). El método mostró buena linealidad, sensibilidad y reproducibilidad, y fue validado frente al método HILIC-MS/MS.
En conjunto, esta tesis demuestra que es posible desarrollar métodos analíticos complementarios, rápidos y adaptables, con aplicaciones reales en estudios clínicos, ambientales o toxicológicos. Las estrategias propuestas permiten una alta eficiencia analítica con bajo requerimiento de manipulación, lo que refuerza su utilidad para estudios de cribado poblacional y vigilancia de la salud ambiental.
