Estudio de la penetración de agente antiinfecciosos en macrófagos utilizando eritrocitos portadores

Abstract

[EN] The first objective of this study was to perform a complete review about the problems in the treatment of intracellular infections. It also reflects the different types of delivery systems currently available and the benefits they bring in the treatment of these infections, as they facilitate access antiinfeciosos agents into the cell. The second objective of this work has been making point and validation of analytical techniques that allow quantification of the drugs studied in different types of biological samples such as erythrocytes, macrophages, plasma and tissues. They have perfected a technique of HPLC-fluorescence for the quantification of amikacin, a technique of HPLC-UV for quantification of zidovudine in red blood cells and a technique for quantifying UPLC-MS/MS zidovudine in plasma and tissues. The third objective of this work has been the development and optimization of methods for the encapsulation in erythrocytes of rats of selected drugs. For the encapsulation of amikacin has been used a hypotonic dialysis technique has been set-up previously in our laboratory. Subsequently, this technique has been optimized for encapsulation of the antiretroviral zidovudine. To do this we have studied the influence of different factors including the initial amount of drug, time on dialysis, and dialysis volume ratio / hypotonic buffer in both the encapsulation efficiency and in hematological properties of erythrocytes. Finally, fourth objective of this work was to study the penetration of amikacin and zidovudine in macrophages both in vitro and in vivo, as well as changes in the pharmacokinetics and tissue distribution of these drugs in rats when administered by carriers incorporated into erythrocytes intraperitoneally, compared with its use in free form.

[ES] El primer objetivo de este trabajo ha sido realizar una completa revisión bibliográfica acerca de la problemática en el tratamiento de las infecciones intracelulares. También se recogen los distintos tipos de sistemas portadores existentes en la actualidad y las ventajas que éstos aportan en el tratamiento de estas infecciones, ya que facilitan el acceso de los agentes antiinfeciosos al interior celular. El segundo objetivo de este trabajo ha sido la puesta a punto y validación de distintas técnicas analíticas que permitan la cuantificación de los fármacos estudiados en diferentes tipos de muestras biológicas, como eritrocitos, macrófagos, plasma y tejidos. Se han puesto a punto una técnica de HPLC-fluorescencia para la cuantificación de amicacina, una técnica de HPLC-ultravioleta para la cuantificación de zidovudina en eritrocitos, y una técnica de UPLC-MS/MS para la cuantificación de zidovudina en plasma y tejidos. El tercer objetivo de este trabajo ha sido la puesta a punto y optimización de métodos que permitan la encapsulación en eritrocitos de rata de los fármacos seleccionados. Para la encapsulación de amicacina se ha utilizado una técnica de diálisis hipotónica que ha sido puesta a punto previamente en nuestro laboratorio. Posteriormente, esta técnica se ha optimizado para la encapsulación del antirretroviral zidovudina. Para ello se ha estudiado la influencia de diferentes factores como la cantidad inicial de fármaco, el tiempo de diálisis, y la relación de volúmenes diálisis/tampón hipotónico, tanto en el rendimiento de encapsulación como en las propiedades hematológicas de los eritrocitos. Finalmente, el cuarto objetivo de este trabajo ha sido el estudio de la penetración de amicacina y zidovudina en macrófagos tanto in vitro como in vivo, así como los cambios en la farmacocinética y en la distribución tisular de estos fármacos en ratas cuando se administran incorporados en eritrocitos portadores por vía intraperitoneal, en comparación con su utilización en forma libre.