Implicación del exómero en la respuesta a estrés de Schizosaccharomyces pombe

Abstract

[ES] En un trabajo anterior del laboratorio se había descubierto que en la levadura de fisión Schizosaccharomyces pombe las proteínas Cfr1 y Bch1 constituyen la forma más sencilla posible de un exómero, formado por un equivalente a Chs5 y una única ChAP (Hoya et al., 2017). Además, se demostró que este exómero mínimo es funcional. La proteína Cfr1 interacciona físicamente con algunos de los adaptadores de clatrina (los complejos AP-1 y AP-2 y los GGAs), y el gen cfr1+ interacciona genéticamente con apm1+, gga21+ y gga22+. La colaboración entre Cfr1 y el complejo AP-1 es necesaria para que la morfología e integridad del Trans-Golgi Network y de los endosomas tempranos sean correctas, mientras que la colaboración entre los GGAs y el exómero es necesaria para el mantenimiento del sistema prevacuolar y de las vacuolas (Hoya et al., 2017). De acuerdo con una función del exómero en varios pasos del tráfico vesicular, y no con el transporte de una proteína en concreto, la falta del exómero presenta una serie de fenotipos, no muy exacerbados, que en principio no parecen estar directamente relacionados entre sí: alteraciones en la morfología del aparato de Golgi, defectos en el tráfico de la carboxipeptidasa o una mala distribución de la sinaptobrevina. Además de los fenotipos mencionados anteriormente, los mutantes del exómero (cfr1Δ, bch1Δ y cfr1Δ bch1Δ) son sensibles a Caspofungina, un antifúngico que afecta a la pared celular, y presentan una cantidad reducida de los niveles de β (1,3)-glucano (que se ve compensada con un incremento en la cantidad de α-glucano). Los mutantes del exómero presentan, también, una ligera disminución del crecimiento a 37ºC o en medio mínimo. Cabe destacar una clara sensibilidad a cloruro de potasio, de modo que los mutantes tienen un crecimiento ralentizado en presencia de KCl a 0,6 M y son incapaces de crecer a una concentración de 1 M de la sal. El KCl no solo provoca defectos en el crecimiento, sino que tratamientos largos (de dieciséis horas) con esta sal (a una concentración de 0,6 M y a una temperatura de 25ºC) provocan la aparición de un septo mal formado con engrosamientos (figura 13) (Hoya et al., 2017). Los objetivos de esta Tesis Doctoral, que se fijaron en base a los fenotipos observados en los mutantes del exómero de S. pombe en respuesta al estrés producido por cloruro de potasio, fueron los siguientes: Objetivo principal: Conocer el papel del exómero de Schizosaccharomyces pombe en la respuesta a estrés. Objetivos específicos: - Caracterizar el defecto de los mutantes cfr1Δ y bch1Δ en la citocinesis y en la sensibilidad a estrés en presencia de compuestos inductores de estrés, en particular de KCl. - Averiguar la relación entre el exómero y las rutas de respuesta a estrés. - Buscar proteínas que colaboren con el exómero en el proceso de citocinesis y en la respuesta a estrés.