Impacto del daño en el DNA en la muerte neuronal isquémica

Abstract

En la isquemia cerebral, la interacción entre los radicales libres de oxígeno (ROS), la acumulación de roturas de doble hebra en el DNA (DSBs) y su implicación en la apoptosis neuronal se desconoce. El objetivo fue estudiar el impacto de las DSBs en la muerte neuronal isquémica y el papel del estrés oxidativo en su formación. Utilizamos cultivos neuronales murinos wild type y con expresión constitutiva de la catalasa en la mitocondria (mCAT) para controlar los niveles endógenos de ROS, que fueron sometidos a isquemia (incubación en ausencia de oxígeno y glucosa) y 4 horas de reoxigenación. Analizando la expresión proteica y la apoptosis neuronal mediante western blot, inmunofluorescencia y citometría de flujo, comprobamos que la isquemia provoca, de manera dependiente del tiempo, la formación de DSBs (incremento de γH2AX) y la generación de ROS por la mitocondria. Ello culmina en la apoptosis, detectada por los marcadores p53, caspasa-3 activa y AnexinaV+/7AAD-. Las neuronas mCAT presentan una menor acumulación de DSBs y apoptosis respecto a las wild type, Nuestros resultados muestran la importancia del estrés oxidativo en la formación de DSBs involucrada en la apoptosis neuronal causada por isquemia y la terapia antioxidante como posible estrategia neuroprotectora frente el ictus.