Generación y análisis funcional de dos mutantes murinos de la recombinasa RAD51B

Abstract

La Insuficiencia Ovárica Prematura (POI) implica una alteración en la función ovárica que causa infertilidad femenina. Recientemente se ha identificado una variante de la recombinasa RAD51B con el extremo N-terminal truncado (RAD51B-c.92delT) en dos hermanas afectadas por POI (Franca et al., 2022). Partiendo de estos resultados, se decidió ratificar la letalidad embrionaria asociada a la deficiencia de Rad51b en ratones, así como validar la función de su extremo N-terminal en meiosis. Para ello, se generaron mediante la tecnología de edición genómica CRISPR/Cas9 los mutantes Rad51bSAES5/SAES5 y Rad51bΔExon3/ΔExon3. El análisis de sus meiocitos reveló un fenotipo similar al de los ratones Rad51bc.92delT/c.92delT, con defectos en la reparación del DNA por una acumulación de γH2AX, RAD51 y BRME1 en los ejes cromosómicos y una reducción en el número de entrecruzamientos, que no impidió la generación de espermatozoides. Estos resultados demuestran que la pérdida de integridad del dominio N-terminal de RAD51B, pese a no causar infertilidad, afecta a la recombinación meiótica y cuestiona si la función de RAD51B es indispensable para el desarrolloembrionario en el ratón.