C3G-mediated suppression of oncogene-induced focus formation in fibroblasts involves inhibition of ERK activation, cyclin A expression and alterations of anchorage-independent growth

Abstract

[ES]Anteriormente demostramos que la sobreexpresión exógena de C3G, un factor liberador de nucleótidos de guanina (GEF) para las proteínas Rap1 y R-Ras, bloquea la actividad formadora de focos de los oncogenes sis, Ras y v-raf en células NIH 3T3. En este informe, mostramos que C3G también interfiere con la actividad de formación de focos de dbl y R-Ras y demostramos que la capacidad supresora de la transformación de C3G se asigna a su región de unión a Crk (dominio SH3-b). Utilizando el mutante C3GDCat, que carece de dominio catalítico, demostramos aquí que la sobreexpresión de C3GDCat cotransfectados inhibía la fosforilación oncogénica de ERK mediada por HRas-lys12, sin alterar la activación de Ras o de la quinasa Raf-1. También demostramos que C3G y C3GDCat sobreexpresados inhibían la viabilidad de colonias oncogénicas inducidas por Ras en agar blando, lo que indica que C3G interfiere con el crecimiento independiente del anclaje de las células transformadas con Ras de una manera independiente de Rap1. De acuerdo con ambas observaciones, la sobreexpresión de C3G y C3GDCat exógenos también causó una regulación negativa de la expresión de ciclina A inducida por Ras. En conjunto, nuestros resultados indican que C3G interfiere con al menos dos aspectos separados de la transformación oncogénica (progresión del ciclo celular y pérdida de inhibición por contacto) y que estos efectos inhibidores probablemente explican su actividad supresora de la transformación.

[EN]We showed previously that exogenous overexpression of C3G, a guanine nucleotide releasing factor (GEF) for Rap1 and R-Ras proteins, blocks the focus-forming activity of cotransfected, activated, sis, ras and v-raf oncogenes in NIH 3T3 cells. In this report, we show that C3G also interferes with dbl and R-Ras focus-forming activity and demonstrate that the transformation suppressor ability of C3G maps to its Crk-binding region (SH3-b domain). Using full-length C3G and C3GΔCat mutant, lacking catalytic domain, we showed here that overexpression of cotransfected C3G or C3GΔCat inhibited oncogenic Hraslys12-mediated phosphorylation of ERK, without altering Ras and Raf-1 kinase activation. We also showed that, overexpressed C3G and C3GΔCat inhibited the viability of oncogenic Ras-induced colonies in soft agar, indicating that C3G interferes with the anchorage-independent growth of Ras-transformed cells in a Rap1-independent manner. Consistent with both observations, overexpression of exogenous C3G and C3GΔCat also caused downregulation of Ras-induced cyclin A expression. Altogether, our results indicate that C3G interferes with at least two separate aspects of oncogenic transformation – cell cycle progression and loss of contact inhibition – and that these inhibitory effects probably account for its transformation suppressor activity.