Targeted disruption of Ras-Grf2 shows Its dispensability for mouse growth and development

Abstract

[ES]Las proteínas Grf1 y Grf2 de mamíferos son factores de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) para las GTPasas Ras que comparten un alto grado de homología estructural, así como un nivel de expresión elevado en los tejidos del sistema nervioso central. Sus similitudes plantean dudas sobre la especificidad y/o redundancia a nivel funcional entre las dos proteínas Grf. Recientemente se han descrito ratones mutantes nulos grf1 que mostraron una reducción fenotípica del crecimiento y pérdida de memoria a largo plazo. Para comprender mejor la función “in vivo” de Grf2, interrumpimos su dominio catalítico CDC25-H mediante edición genética. La reproducción entre animales grf2 KO dio lugar a animales adultos grf2 KO viables con un patrón mendeliano normal, lo que sugiere que Grf2 no es esencial para el desarrollo embrionario y del ratón adulto. A diferencia de los ratones sin Grf1, el análisis de las camadas de grf2 KO mostró un tamaño y peso similares a los de sus contrapartes heterocigotas o de tipo salvaje. Además, los animales adultos grf2 KO alcanzaron la madurez sexual a la misma edad que sus compañeros de camada de tipo salvaje y mostraron niveles de fertilidad similares. No se observó ninguna patología específica en animales adultos con Grf2 nulo, y los estudios histopatológicos no mostraron diferencias observables entre los ratones Grf2 mutantes nulos y de tipo salvaje. Estos resultados indican que grf2 es prescindible para el crecimiento, el desarrollo y la fertilidad del ratón. Además, el análisis de animales nulos dobles grf1/grf2 no mostró ninguna diferencia fenotípica observable con animales grf1 KO sencillos, lo que indica además una falta de superposición funcional entre las dos proteínas Grf1 y Grf2 que de otro modo serían altamente homólogas.

[EN]The mammalian Grf1 and Grf2 proteins are Ras guanine nucleotide exchange factors (GEFs) sharing a high degree of structural homology, as well as an elevated expression level in central nervous system tissues. Such similarities raise questions concerning the specificity and/or redundancy at the functional level between the two Grf proteins. grf1-null mutant mice have been recently described which showed phenotypic growth reduction and long-term memory loss. To gain insight into the in vivo function of Grf2, we disrupted its catalytic CDC25-H domain by means of gene targeting. Breeding among grf2+/− animals gave rise to viable grf2 −/− adult animals with a normal Mendelian pattern, suggesting that Grf2 is not essential for embryonic and adult mouse development. In contrast to Grf1-null mice, analysis of grf2 −/− litters showed similar size and weight as their heterozygous or wild-type grf2 counterparts. Furthermore, adult grf2 −/− animals reached sexual maturity at the same age as their wild-type littermates and showed similar fertility levels. No specific pathology was observed in adult Grf2-null animals, and histopathological studies showed no observable differences between null mutant and wild-type Grf2 mice. These results indicate that grf2 is dispensable for mouse growth, development, and fertility. Furthermore, analysis of double grf1/grf2 null animals did not show any observable phenotypic difference with single grf1 −/− animals, further indicating a lack of functional overlapping between the two otherwise highly homologous Grf1 and Grf2 proteins.