Marcadores exomales en epilepsia

Abstract

Los exosomas son microvesículas nanométricas secretadas por todo tipo de células y ampliamente distribuidas por el organismo. Están formadas por varios componentes, entre los que destacan los ácidos nucleicos y diferentes familias de proteínas. Estos componentes dotan a los exosomas de la capacidad de llevar a cabo diversas funciones, siendo la más destacable de ellas la mediación en la comunicación intercelular. Objetivos. Realizar una revisión exhaustiva de la bibliografía existente sobre los exosomas y un abordaje práctico de dos de los principales métodos para su aislamiento: cromatografía por exclusión de tamaños y separación por inmunoafinidad. Material y métodos. Se utilizó plasma sanguíneo obtenido de pacientes epilépticos del Hospital Universitario de Salamanca, previa firma del consentimiento informado. De las muestras resultantes de ambos métodos se estudió el tamaño, la forma y la integridad de las vesículas encontradas mediante un sistema de seguimiento de nanopartículas Nanosight NS30 y microscopía electrónica de transmisión. El perfil proteico se obtuvo mediante espectrometría de masas en tándem. Resultados. Los exosomas se postulan como prometedores biomarcadores para el diagnóstico y pronóstico de diferentes patologías. La investigación sobre exosomas está en auge, aunque falta estandarización en los procesos de aislamiento. Entre estos últimos, destacan la cromatografía de exclusión por tamaño y la separación por inmunoafinidad. Ambos métodos permiten la obtención de microvesículas, que se confirma mediante microscopía electrónica de transmisión. Mediante espectrometría de masas se identificaron 352 proteínas en la muestra obtenida por cromatografía de exclusión y 297 en la muestra de separación por inmunoafinidad. Solo se detectaron marcadores exosomales en la muestra de separación por inmunoafinidad. Conclusiones. Ambos métodos son válidos para el aislamiento de vesículas extracelulares pero únicamente la separación por inmunoafinidad permite el aislamiento de exosomas de forma específica, detectándose marcadores exosomales en la muestra.